2011-03-30
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이효지(koko7912)
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annexin-V와 PI staining을 준비하는 학생입니다.
annexin-V-FITC (santacruz)와 PI stainig을 해서
apoptosis를 확인해보려고 하는데요.
cell에 처리하는 것이 chemical agent가 아닌 pathogenic microbe입니다.
일반 chemical agent면 fixation 단계를 하지 않아도 된다고 하는데,
pathogenic microbe이다보니 fixation을 해야할지 말아야할지 고민이 되어서요
fixation을 해야한다면
어느 단계에서 해야하는지, fixation을 하고 FACS calibur로 읽어도 되는지
알려주세요! 아직 FACS 초보자입니다.
- Annexin-V
- PI staining
- fixation
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 1
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답변
김현선님의 답변
2011-03-31- 0
annexin-V 는 살아 있는 세포에 내벽으로 들어가서 형광을 발하지 않고 죽은 세포에는 형광을 발하는 걸로 구분합니다. 이때 fix를 하게 되면 세포벽에 pore가 모두 열리기 때문에 구분을 안됩니다. PI는 일반적으로 fix를 합니다. 이것은 핵을 염색하는 것이기 때문에 세포벽의 pore를 모두 열어줘야 유리합니다. 두 가지를 함께 하시려면 annexin-V를 먼저 하시고 고정한 후 PI를 하세요. 만약 PI를 모든 세포에 하는 것이 아니라 apop을 준비하거나 apop 세포만 하려는 특정 목적이 있다면 모르겠지만 그게 아니라면 annexin-V 반응이 끝나고 washing 하여 잔여 annexin-V를 없앤 후 fis한 다음 PI 를 해야할 것 같습니다. 그리고 fix 유무를 결정 하는 것은 전처리 된 것에 의존적인 사항이 아니고 staining을 하는 원료에 의존적이니 참고 하세요. 또한 세포마다 다를 수 있으니 준비하는 학생이시라면 중요한 시료를 바로 해보는 것이 아니라 본인의 stain 방법에 문제가 없는 지 한번 확인해 보세요. > >annexin-V와 PI staining을 준비하는 학생입니다. > >annexin-V-FITC (santacruz)와 PI stainig을 해서 >apoptosis를 확인해보려고 하는데요. > >cell에 처리하는 것이 chemical agent가 아닌 pathogenic microbe입니다. >일반 chemical agent면 fixation 단계를 하지 않아도 된다고 하는데, >pathogenic microbe이다보니 fixation을 해야할지 말아야할지 고민이 되어서요 > >fixation을 해야한다면 >어느 단계에서 해야하는지, fixation을 하고 FACS calibur로 읽어도 되는지 >알려주세요! 아직 FACS 초보자입니다. >