2011-04-07
org.kosen.entty.User@2c495a44
김은(rubsang)
- 3
안녕하세요- 이제 막 물질 분리를 접한 왕초보 입니다.
제가 현재 silica gel open column fraction을 sephadex LH-20으로 분리 하려고하는데, sephadex는 처음 사용해 보는지라 문의를 드립니다.
1. swelling시, 용매는 전개하려는 용매로 해야 하는건가요?
amberlited의 경우, aceton으로 세척 후, 물로 elute시키고 샘플을 흘려주고
MeOH 농도를 달리하며 실험을 진행 했었는데, sephadex의 경우에는 따로 세척은 안해
도 되는건가요? (현재 한번도 사용하지 않은 새sephadex로 실험을 하려고 하는 중)
2. 전개 용매의 경우 꼭 1가지 용매로만 흘려줘야 하나요?
swelling을 물로 하고, 샘플을 물에 현탁한 후, 처음에는 물로 elute시키다 MeOH를
넣어 MeOH 농도를 증가시키면 안되는 지요?
(예, 물, 30%MeOH, 50% MeOH, 80%MeOH, 100% meOH)
3. 팽윤시키고, 컬럼에 충진하는 법도 궁금합니다.
silica gel 컬럼 충진시 처럼 용매에 섞어 slurry상태로 하는건지요..
아- 제가 물질분리도 해본지 얼마 안됐는데, 고가의 sephadex LH-20을 하려니
더 긴장이 되서요 ㅠㅠ
그럼 도움 부탁 드리겠습니다.
제가 현재 silica gel open column fraction을 sephadex LH-20으로 분리 하려고하는데, sephadex는 처음 사용해 보는지라 문의를 드립니다.
1. swelling시, 용매는 전개하려는 용매로 해야 하는건가요?
amberlited의 경우, aceton으로 세척 후, 물로 elute시키고 샘플을 흘려주고
MeOH 농도를 달리하며 실험을 진행 했었는데, sephadex의 경우에는 따로 세척은 안해
도 되는건가요? (현재 한번도 사용하지 않은 새sephadex로 실험을 하려고 하는 중)
2. 전개 용매의 경우 꼭 1가지 용매로만 흘려줘야 하나요?
swelling을 물로 하고, 샘플을 물에 현탁한 후, 처음에는 물로 elute시키다 MeOH를
넣어 MeOH 농도를 증가시키면 안되는 지요?
(예, 물, 30%MeOH, 50% MeOH, 80%MeOH, 100% meOH)
3. 팽윤시키고, 컬럼에 충진하는 법도 궁금합니다.
silica gel 컬럼 충진시 처럼 용매에 섞어 slurry상태로 하는건지요..
아- 제가 물질분리도 해본지 얼마 안됐는데, 고가의 sephadex LH-20을 하려니
더 긴장이 되서요 ㅠㅠ
그럼 도움 부탁 드리겠습니다.
- sephadex LH-20
- sephadex LH-20 충진
- 용매
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답변 3
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답변
조윤환님의 답변
2011-04-07- 0
얼마전에도 같은 내용에 대한 답변을 드린 바 있고 이 게시판의 내용 중에도 같은 내용의 답변이 많이 있습니다. 글제목 중에서 'sephadex LH-20'을 검색하면 원하시는 답변을 확인하실 수 있을 겁니다. 자세한 내용은 다음 링크를 확인하세요. 자세히 설명되어 있습니다. http://www.gelifesciences.com/aptrix/upp00919.nsf/Content/E1EAFB82CA45CBF2C1257628001D0C85/$file/56119097AD.pdf -
답변
조윤환님의 답변
2011-04-08- 0
Sephadex LH-20 관련해선 이미 문의와 답변이 많은 상태라 그것들만 읽어보셔도 되리라 생각했는데..... 이해하는데 문제가 있으셨군요. 특히 제가 추천드린 문헌에 gradient 방식을 제외한 설명이 모두 정리되어 있었거든요. 1. swelling은 전개용매로 하는게 기본입니다. 세척은 따로 하지않고.....bed가 깨져서 생기는 작은 입자를 따라내버리는 정도가 다입니다. 충분히 불려서 사용하시면 됩니다. 한가지 주의할 점은 swelling할 때 magnetic bar로 하시는 것은 피하싶시요. 입자가 갈리면서 깨질 수 있거든요. 2. swelling을 물로 하고, 물로 elution하다가 차츰 MeOH의 양을 늘려가는 방식도 가능합니다. 보통 gradient 방식이라고 하는데..... 예로 드신 방법은 step gradient방식이고요..... 연속적으로 변화시키는 방법을 linear gradient방식이라고 합니다. 한데 샘플을 현탁하신다고 했느네..... 녹지 않는 입자가 있나요? 그거 보통은 여과해서 제거 합니다만.... 3. 팽윤시키고, 컬럼에 충진하는 법은 말씀하신데로 silica gel 컬럼 충진시 처럼 용매에 섞어 slurry상태로 합니다. -
답변
김상태님의 답변
2011-04-15- 0
>안녕하세요- 이제 막 물질 분리를 접한 왕초보 입니다. >제가 현재 silica gel open column fraction을 sephadex LH-20으로 분리 하려고하는데, sephadex는 처음 사용해 보는지라 문의를 드립니다. > >1. swelling시, 용매는 전개하려는 용매로 해야 하는건가요? > amberlited의 경우, aceton으로 세척 후, 물로 elute시키고 샘플을 흘려주고 > MeOH 농도를 달리하며 실험을 진행 했었는데, sephadex의 경우에는 따로 세척은 안해 > 도 되는건가요? (현재 한번도 사용하지 않은 새sephadex로 실험을 하려고 하는 중) >2. 전개 용매의 경우 꼭 1가지 용매로만 흘려줘야 하나요? > swelling을 물로 하고, 샘플을 물에 현탁한 후, 처음에는 물로 elute시키다 MeOH를 > 넣어 MeOH 농도를 증가시키면 안되는 지요? > (예, 물, 30%MeOH, 50% MeOH, 80%MeOH, 100% meOH) >3. 팽윤시키고, 컬럼에 충진하는 법도 궁금합니다. > silica gel 컬럼 충진시 처럼 용매에 섞어 slurry상태로 하는건지요.. > >아- 제가 물질분리도 해본지 얼마 안됐는데, 고가의 sephadex LH-20을 하려니 >더 긴장이 되서요 ㅠㅠ >그럼 도움 부탁 드리겠습니다. -처음에 MEOH로 세척하고 순차적으로 농도를 낮추어서 용출하고 활성화시키면 됨
아 역시- 올려 주신 파일을 이미 다운 받아 본 상태 였고,
검색을 통해서 보긴 했는데,, 이해가 잘 되지 않아
다시 질문을 드렸습니다ㅠㅠ