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HPLC로 Chiral 분석을 하고자 합니다.
지금 가지고 있는 chiral column이 DAICEL, CHIRALPAK IC 입니다.
이동상조건이 없어서 Hx:IP=90:10 으로 해서 일단 조건을 잡으려고 하는데
궁금한것이 생겼습니다.
1. Chiral column 은 유기용매를 사용 할 수는 없나요???
일단 논문들을 찾아보면 거의 Hx, EtOH, IPA 등을 사용하던데
이유가 궁금합니다.
답변 부탁드리겠습니다^^
- Chiral
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변
조윤환님의 답변
2011-07-14- 0
유기용매 사용이 가능합니다. Hx, EtOH, IPA 도 유기용매지만 이외에 다른 용매도 사용가능합니다.
보통 사용 가능한 용매의 종류는 컬럼에 동봉되어 있는 메뉴얼에 명시되어 있습니다. 없으면... 메이커의 기술자료를 뒤져보면 됩니다.
DAICEL, CHIRALPAK IC 컬럼은 immobilized polysaccharide chiral stationary phase 컬럼으로 비교적 최근에 출시된 컬럼입니다.
Hx, EtOH, IPA 외에도 다른 유기용매를 사용할 수 있지만, 이 컬럼을 이용한 분석법개발지침 자체가 1차적으로 Hexane을 기본으로 alcohol modifier를 선택한 후 80:20 정도에서 분석해 그 결과를 바탕으로 조성을 최적하는 방식을 권장하고 있습니다.
수없이 시행착오를 거듭해서 최적화한 지침이므로 따르는 것이 가장 빠른 길이라고 생각합니다.
다음 링크를 참고하세요(http://www.chiraltech.com/spec_sheet/MethodDevelopmentSchemes.pdf)
-------------------------------------질문-------------------------------------
HPLC로 Chiral 분석을 하고자 합니다.
지금 가지고 있는 chiral column이 DAICEL, CHIRALPAK IC 입니다.
이동상조건이 없어서 Hx:IP=90:10 으로 해서 일단 조건을 잡으려고 하는데
궁금한것이 생겼습니다.
1. Chiral column 은 유기용매를 사용 할 수는 없나요???
일단 논문들을 찾아보면 거의 Hx, EtOH, IPA 등을 사용하던데
이유가 궁금합니다.
답변 부탁드리겠습니다^^
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답변
이상후님의 답변
2011-07-14- 0
-------------------------------------질문-------------------------------------
HPLC로 Chiral 분석을 하고자 합니다.
지금 가지고 있는 chiral column이 DAICEL, CHIRALPAK IC 입니다.
이동상조건이 없어서 Hx:IP=90:10 으로 해서 일단 조건을 잡으려고 하는데
궁금한것이 생겼습니다.
1. Chiral column 은 유기용매를 사용 할 수는 없나요???
일단 논문들을 찾아보면 거의 Hx, EtOH, IPA 등을 사용하던데
이유가 궁금합니다.
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Hx, IPA 등도 유기용매입니다만..질문하신 유기용매가 어떤 성격을 갖는 용매를 의미하는지요?..
짐작하기론 부분적으로 친수성 특징이 높은 유기용매, 즉 methanol이나 ACN 등을 의미하는지요?..모든 chiral column이 Hx이나 CH2Cl2 등과 같이 매우 소수성 성질의 유기용매를 사용하지는 않습니다. 아시다시피 키랄 컬럼의 고정상은 Pirkle type, Da vankov ligand exchange 등도 많이 사용하고 종종, cyclodextrin-bonded 고정상이나 protein-based 고정상도 사용하고 있습니다.
Pirkle type, Da vankov ligand exchange 의 경우는 고정상 자체가 소수성 성질이 강한 키랄 selector 를 구조적으로 가지고 있기 때문에 친수적 성질의 유기용매의 사용은 바람직하지 않습니다. 반면에 protein-based 또는 cyclodextrin-based 키랄 컬럼은 고정상 자체가 친수적 성질이 있기 때문에 물이나 버퍼와 메탄올 같은 알콜류의 적정 비율로 이동상을 사용하는 경우가 있습니다.
물론 이동상을 선택할 때는 고정상 특징 뿐만 아니라 분리하고자 하는 키랄 성분들이 사용하는 이동상에 잘 녹아야 한다는 전제 조건이 있습니다.
종종 Naphthylleucine 이 연결된 키랄 컬럼의 경우는 메탄올과 10mM KH2P04(pH 7)를 80:20의 비율로 혼합하여 N-(3,5-Dinitrobenzoyl) valine 키랄 물질을 분리할 수 있습니다.
다른 예로, alpha-acid glycoprotein이 연결된 chiral column의 경우는 보통 역상 모드에서 분리에 적용하고 있습니다. 즉, 다양한 amine류와 esters, sulfoxides류, acids류 등을 분리하는데
10% acetonitrile (in 10 mM sodium phosphate buffer, pH 6.5)을 이동상으로 사용해서 분리할 수 있습니다. 이처럼 모든 chiral 컬럼이 hex이나 IPA, chcl3같은 매우 소수성 유기용매를 사용하지는 않습니다. 참고하시기 바랍니다.
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답변
조윤환님의 답변
2011-07-14- 0
혼동을 피하고자 부연 설명을 올립니다.
Chiralpak IC컬럼은 엄밀이 따지자면 Pirkle type에 해당하는 chiral selector를 가지고 있는 컬럼입니다. 구조적으로 소수성을 가지고 있기 때문에 소수성 용매를 사용하는 것이 맞지만.... 알콜이나 에테르 같은 소위 친수성 용매의 사용이 금기시 되는 것은 아닙니다.
오히려 소수셩 용매의 elution strength를 조절하는 조절자로서 친수성 용매를 적극적으로 사용하고 있습니다. 심지어는 TFA나 acetic acid까지도 소량이지만 사용합니다.
다만 이동상의 주성분은 소수성 용매가 되어야겠죠. 친수성 용매가 주가 될 경우 분리를 기대하기 어려워질 수 있다는 정도로 이해하시면 되겠습니다.
기술 자료에 따르면 이 컬럼에 손상을 입힐 수 있는 용매는 없다고 합니다. 완충 용액의 사용도 가능하고, 오염이나 흡착이 심할 경우엔 THF, ethyl acetate 또는 DMF로 세척할 것을 권장하고 있습니다.
일부 바이오 연구용 시료의 경우 DMSO에 희석된 형태로 사용되기도 하는데..... 이러한 시료를 분석해도 컬럼 자체에 손상이 발생하는 것은 아니고... 반복적으로 분석을 시행할 경우 DMSO 때문에 분리능이 일시적으로 떨어질 수는 있으나 세척을 통해 복원이 가능하다고 합니다.
한 가지 주의할 것은 모든 HPLC 컬럼이 공통적으로 그러하듯이 일정 pH범위를 넘어서는 조건에선 사용하지 말아야 합니다.
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답변
한치형님의 답변
2011-07-19- 0
RStech에서 chiral 물질의 analysis service를 제공하고 있습니다.
http://rstechcorp.co.kr/kor/product/support/anre/analysis/request.php
기타 Daicel column에 대한 궁금한 점이 있으면 전화주시면 자세히 알려드릴 것입니다.
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HPLC로 Chiral 분석을 하고자 합니다.
지금 가지고 있는 chiral column이 DAICEL, CHIRALPAK IC 입니다.
이동상조건이 없어서 Hx:IP=90:10 으로 해서 일단 조건을 잡으려고 하는데
궁금한것이 생겼습니다.
1. Chiral column 은 유기용매를 사용 할 수는 없나요???
일단 논문들을 찾아보면 거의 Hx, EtOH, IPA 등을 사용하던데
이유가 궁금합니다.
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