KOSEN 한인과학기술자네트워크

-------------------------------------질문-------------------------------------

현미경을 이용하여 균수를 측정할 계획입니다만

모르는게 많아 문의 드립니다.

지금 하려는 일이 UV spectrophotometer과 hematocytometer를 이용하여 균수를측정하려고 하는데요.(물론 평판배양법을 함께 사용할 겁니다)

hematocytometer를 사용해서 미생물을 계수 할 때 염색이 필수 인지 궁금하네요

(대장균, 폐렴간균, 황색포도상구균, 살모넬라균 이외 푸른곰팡이, 흑곰팡이)

일단 실험실내 염색 시약을 찾아보니

malachite green, lactophenol blue sol'n, coomassie brilliant blue

이런 종류가 보이더라고요. 용도를 찾아 보고 제조법을 찾아보는데 당췌;;;;;-_- 답이 안나오네요

질문 내용은 다음과 같습니다 ㅠㅠ

1. hematocytometer를 사용해서 미생물을 계수 할 때 염색이 필수 인지 궁금하네요

2. 염색이 필수라면 염색시 염색약이 들어감으로 인해 계수할때 희석되는것을 감안해야하죠?

3. 염색약이 들어가 희석되어 계수시 문제가 되지 않도록 하는 방법은 뭔가요?

4. 염색 시약의 제조 및 용도

모르는게 너무 많아 질문이많네요 . 미리 감사드립니다

우선, 1번 질문에 대해서,

hematocytometer를 사용해서 미생물을 계수 할 때 염색하는 이유는 살아있는 세포수를 측정하기 위해 trypan blue라는 azo dye group에 속하는 음이온성 염색액을 사용해서 살아 있는 세포는 이 염색액이 흡수되지 않고 죽은 세포는 흡수되어 파란색으로 염색이 되는 원리를 이용해서 생균수를 측정하는 방법입니다. 따라서 이 점을 감안해서 실험하시면 될 거 같구요..

나머지 질문에 대해서,

당연히 염색액이 들어감으로서 계수할 때 희석되는것을 감안해야 됩니다.

예를 들어서  tryphan blue로 염색을 해서 counting을 했다면 tryphan blue와 1:1로 혼합하게 되어서 2배 희석되므로 x2 를 해야 합니다. 아뭏튼 원래 부피에서 외부에서 첨가해 주는 염색액이든 배지 희석액이든 간에 부피가 증가되면 증가된 만큼 고려를 해 줘야 됩니다.

Trypan Blue는 시약공급업체에서 쉽게 구입할 수 있습니다. 보통 희석은 사용하고자 하는 배지나 0.8 mM PBS에 희석해서 사용할 수 있으며 실온에 보관하고 약 한 달 동안 안정합니다.

참고하시기 바랍니다.

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현미경을 이용하여 균수를 측정할 계획입니다만

모르는게 많아 문의 드립니다.

지금 하려는 일이 UV spectrophotometer과 hematocytometer를 이용하여 균수를측정하려고 하는데요.(물론 평판배양법을 함께 사용할 겁니다)

hematocytometer를 사용해서 미생물을 계수 할 때 염색이 필수 인지 궁금하네요

(대장균, 폐렴간균, 황색포도상구균, 살모넬라균 이외 푸른곰팡이, 흑곰팡이)

일단 실험실내 염색 시약을 찾아보니

malachite green, lactophenol blue sol'n, coomassie brilliant blue

이런 종류가 보이더라고요. 용도를 찾아 보고 제조법을 찾아보는데 당췌;;;;;-_- 답이 안나오네요

질문 내용은 다음과 같습니다 ㅠㅠ

1. hematocytometer를 사용해서 미생물을 계수 할 때 염색이 필수 인지 궁금하네요

2. 염색이 필수라면 염색시 염색약이 들어감으로 인해 계수할때 희석되는것을 감안해야하죠?

3. 염색약이 들어가 희석되어 계수시 문제가 되지 않도록 하는 방법은 뭔가요?

4. 염색 시약의 제조 및 용도

모르는게 너무 많아 질문이많네요 . 미리 감사드립니다