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초보적인 내용만 늘 여기 선생님들께 물어서 정말 죄송합니다.
주위에 실험하는 사람이 없다보니 물어 볼 곳이 참으로 마땅하지가 않군요...
초저온냉동보관용 solution에
glycerol이 20%이상 포함되야 된다는 건 알겠는데,
glycerol을 사려고 보니까 너무 가격이 천차만별이네요.
어떤 조건을 가지 glycerol을 사야되는 거죠?
뭐가 다른지도 모르겠어요.
다들 glycerol을 autoclave해서 microtube에 담아놨다가
균이 자란 배지를 일정량 떠서 넣으라고 되어 있던데...
저는 액체배지가 아니고 petri dish에서 자란 colony를 따려고 하는 건데요.
그럼 아예 배지+glycerol을 조성을 맞춰서 같이 autoclave를 돌려서
microtube에다 넣으면 안 되는 건가요?
nutrient broth를 안 사고 skim milk를 사용해서 glycerol과 같이 autoclave돌려서
초저온냉동보관용 solution을 만들면 안되는 건지?
혹시 초저온냉동보관용 solution을 돈이 적게 들고 간단하게 만드는 법을
아주 쉽게 가르쳐 주실 분 안계신가요?
부탁드립니다.
- 세균의 초저온냉동보관
- glycerol
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변
이상후님의 답변
2011-07-15- 0
첨부파일
-------------------------------------질문-------------------------------------
초보적인 내용만 늘 여기 선생님들께 물어서 정말 죄송합니다.
주위에 실험하는 사람이 없다보니 물어 볼 곳이 참으로 마땅하지가 않군요...
초저온냉동보관용 solution에
glycerol이 20%이상 포함되야 된다는 건 알겠는데,
glycerol을 사려고 보니까 너무 가격이 천차만별이네요.
어떤 조건을 가지 glycerol을 사야되는 거죠?
뭐가 다른지도 모르겠어요.
다들 glycerol을 autoclave해서 microtube에 담아놨다가
균이 자란 배지를 일정량 떠서 넣으라고 되어 있던데...
저는 액체배지가 아니고 petri dish에서 자란 colony를 따려고 하는 건데요.
그럼 아예 배지+glycerol을 조성을 맞춰서 같이 autoclave를 돌려서
microtube에다 넣으면 안 되는 건가요?
nutrient broth를 안 사고 skim milk를 사용해서 glycerol과 같이 autoclave돌려서
초저온냉동보관용 solution을 만들면 안되는 건지?
혹시 초저온냉동보관용 solution을 돈이 적게 들고 간단하게 만드는 법을
아주 쉽게 가르쳐 주실 분 안계신가요?
부탁드립니다.
Glycerol은 가능하면 순도가 좋은 것으로 사용하는 것이 좋습니다만, 여의치 않다면 autoclave를 확실히만 해도 사용하는데는 크게 문제되지는 않습니다.
그런데, 최근 발표자료에 의하면 가장 많이 사용되는 15% glycerol stock보다는 10% skim milk에 보관하는 것이 cell recovery가 더 좋은 것으로 알려져 있습니다.
그런데 Agar plat에 culture한 균주도 멸균한 cotton swab을 사용해서 균주를 떼어내어 미리 멸균한 10% skim milk(commercial product 사용 권장합니다) 의 약 2 mL에 넣고 -80'C에 보관해도 cell viability를 확보하는데 좋은 방법입니다. 최근에 이와 관련된 발표 논문을 첨부파일로 업로드 하니 참고가 될 것입니다.
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답변
장성재님의 답변
2011-07-18- 0
첨부파일
glycerol은 시약용으로 99% 이상되는 것을 사용하시면 큰 무리는 없습니다.
물론 glycerol이나 skim milk 모두 사용가능하시구요.
실험실에 시약용 glycerol이 있으시다면 적당한 농도로 희석하신 후 (희석하시면 점도가 떨어지므로 다루기 쉽습니다.) autoclave하셔서 사용하시면 됩니다. agr plate 상의 균체를 백금이 등으로 긁어내서 배지에 일단 분산시키신 후 (vortexing) 40% glycerol과 1대1 희석하셔도 무관합니다.
Final glycerol의 농도는 10~50% 까지는 제 경험으론 아무런 문제가 없었습니다.
보다 저렴한 쪽으로 skim milk와 glycerol 중에 하나를 선택하시면 좋을 듯 싶습니다.
-------------------------------------질문-------------------------------------
초보적인 내용만 늘 여기 선생님들께 물어서 정말 죄송합니다.
주위에 실험하는 사람이 없다보니 물어 볼 곳이 참으로 마땅하지가 않군요...
초저온냉동보관용 solution에
glycerol이 20%이상 포함되야 된다는 건 알겠는데,
glycerol을 사려고 보니까 너무 가격이 천차만별이네요.
어떤 조건을 가지 glycerol을 사야되는 거죠?
뭐가 다른지도 모르겠어요.
다들 glycerol을 autoclave해서 microtube에 담아놨다가
균이 자란 배지를 일정량 떠서 넣으라고 되어 있던데...
저는 액체배지가 아니고 petri dish에서 자란 colony를 따려고 하는 건데요.
그럼 아예 배지+glycerol을 조성을 맞춰서 같이 autoclave를 돌려서
microtube에다 넣으면 안 되는 건가요?
nutrient broth를 안 사고 skim milk를 사용해서 glycerol과 같이 autoclave돌려서
초저온냉동보관용 solution을 만들면 안되는 건지?
혹시 초저온냉동보관용 solution을 돈이 적게 들고 간단하게 만드는 법을
아주 쉽게 가르쳐 주실 분 안계신가요?
부탁드립니다.