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세포 실험을 처음 하는 초짜구요
랩에서도 세포로 형광을 찍은 적이 없어서 자료를 찾아보고 있는데 잘 모르겠어서 이렇게 도움을 구하고 있습니다ㅠ
세포의 핵과 세포질을 각각 다른 색으로 염색해서 관찰하고 싶은데요
대부분 논문을 찾아보니 셀을 픽스시키고 이차 항체를 이용해서 관찰하는 것 같던데
논문에 있는 프로토콜은 두루뭉실하게 나와있어서 그대로 따라하기가 힘이 듭니다
칼세인으로 살아있는 세포를 염색시키는 것은 할 수 있을 것 같은데
동시에 다른 색으로 핵을 염색하고 싶어서요..
제 질문을 요약하면
1. 2차 항체를 이용해서 동시에 핵과 세포질에 각각 다른 색으로 염색하는 정확한 프로토콜 있다면 부탁드립니다.
2. 2차 항체를 쓰지 않고 핵과 세포질을 각각 다른 색으로 염색하는 방법이 있나요?
3. 세포를 픽스시키는게 정확히 어떤 건가요? 미이라처럼 그 형태 그대로 보존하는건가요? 아니면 웰에 부착시키는건가요?? 일단 픽스 시키면 죽었다고 봐야하는거죠?
- 면역형광법
- 형광
- 2차항체
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변
이승규님의 답변
2012-02-02- 0
4% paraformaldehyde를 처리하면 단백질 고정으로 세포 및 조직이 fixation됩니다. 세포질 단백질에 결합하는 1차 항체, 그 다음 1차 항체에 결합하는 2차 항체 처리한 후 mounting solution(vectashield with dapi)을 사용하면 파란색의 핵을 볼 수 있습니다.
-------------------------------------질문-------------------------------------
세포 실험을 처음 하는 초짜구요
랩에서도 세포로 형광을 찍은 적이 없어서 자료를 찾아보고 있는데 잘 모르겠어서 이렇게 도움을 구하고 있습니다ㅠ
세포의 핵과 세포질을 각각 다른 색으로 염색해서 관찰하고 싶은데요
대부분 논문을 찾아보니 셀을 픽스시키고 이차 항체를 이용해서 관찰하는 것 같던데
논문에 있는 프로토콜은 두루뭉실하게 나와있어서 그대로 따라하기가 힘이 듭니다
칼세인으로 살아있는 세포를 염색시키는 것은 할 수 있을 것 같은데
동시에 다른 색으로 핵을 염색하고 싶어서요..
제 질문을 요약하면
1. 2차 항체를 이용해서 동시에 핵과 세포질에 각각 다른 색으로 염색하는 정확한 프로토콜 있다면 부탁드립니다.
2. 2차 항체를 쓰지 않고 핵과 세포질을 각각 다른 색으로 염색하는 방법이 있나요?
3. 세포를 픽스시키는게 정확히 어떤 건가요? 미이라처럼 그 형태 그대로 보존하는건가요? 아니면 웰에 부착시키는건가요?? 일단 픽스 시키면 죽었다고 봐야하는