KOSEN 한인과학기술자네트워크

닫기

더 많은 혜택을 위해
로그인 하세요.

지식나눔

지식나눔

fibroblast cell x-gal staining 실험

2012-02-02 org.kosen.entty.User@78adbe9d 신영인(akingpost)
  • 2

HS27 cell로 X-gal 염색을 진행하고 있는데
X-gal 의 농도가 final 1mg/ml이 되게끔 제조하고 있습니다.

염색 후 24시간 후에 관찰하는데 염색이 되긴 되는데 다른 논문들처럼 대다수의 세포가 염색되진 않습니다.

농도를 늘릴까 싶은데 X-gal시약이 Sigma-B4252 50mg에 115,000원 하더군요.
50mg이면 겨우 2번 실험할 양인데, 너무 가격이 비싼거 같습니다.

혹시 다른 시약에서 대등한 결과를 얻으셨다면 시약 좀 추천해주세요.
그리고 농도도 알려주세요.
또, 염색되는 과정이 24hr이 걸려야되는 가요? 37도에서 24hr을 견디려면 염색약이 많아야 다음날까지 굳지않고 염색이 될텐데..

여러 어려움이 있습니다. 실험해보신 분들께서 조언 좀 부탁드려요^^ 감사합니다.

[staining solution]
0.2M citric acid 3.7ml
0.4M Na2HPO4 6.3ml
20mg/ml X-Gal 1ml
100mM potassium ferricyanide 1ml
100mM potassium ferroctanide 1ml
5M NaCl 600ul
0.2M MgCl2 200ul
D.W. 6.2ml

  • X-Gal
  • fibroblast
  • staining
지식의 출발은 질문, 모든 지식의 완성은 답변! 
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
답변하기
답변 2
  • 답변

    신용현님의 답변

    2012-02-03
    • 2

     제가 HS27 cell 을 사용해 보지 않아서 잘은 모르겠습니다.

    보통 x-gal 염색은 1시간에서 over night 처리 하기도 합니다.

    50mg을 가지고 두번밖에 못한다고 하셨는데 한번 실험할때 25ml씩 사용하시나요?

    한 슬라이드에 100-500ul 면 충분할텐데 

    많이 사면 살수록 시약값은 내려감니다. 한번 살때 충분한 양을 사시는 것도 실험비를 아끼는 방법입니다.

    만약 spectrophotometer 를 사용하신면 ONPG로 대체 하실수 있습니다.

    보통 staining 할때는 증발을 막기위해서 humid chember를 사용합니다.

     

    답이 ？는지 모르겠네요

    더 궁금 한게 있음 연락 주세요

     

    -------------------------------------질문-------------------------------------

    HS27 cell로 X-gal 염색을 진행하고 있는데
    X-gal 의 농도가 final 1mg/ml이 되게끔 제조하고 있습니다.

    염색 후 24시간 후에 관찰하는데 염색이 되긴 되는데 다른 논문들처럼 대다수의 세포가 염색되진 않습니다.

    농도를 늘릴까 싶은데 X-gal시약이 Sigma-B4252 50mg에 115,000원 하더군요.
    50mg이면 겨우 2번 실험할 양인데, 너무 가격이 비싼거 같습니다.

    혹시 다른 시약에서 대등한 결과를 얻으셨다면 시약 좀 추천해주세요.
    그리고 농도도 알려주세요.
    또, 염색되는 과정이 24hr이 걸려야되는 가요? 37도에서 24hr을 견디려면 염색약이 많아야 다음날까지 굳지않고 염색이 될텐데..

    여러 어려움이 있습니다. 실험해보신 분들께서 조언 좀 부탁드려요^^ 감사합니다.

    [staining solution]
    0.2M citric acid 3.7ml
    0.4M Na2HPO4 6.3ml
    20mg/ml X-Gal 1ml
    100mM potassium ferricyanide 1ml
    100mM potassium ferroctanide 1ml
    5M NaCl 600ul
    0.2M MgCl2 200ul
    D.W. 6.2ml

    답변수정

     제가 HS27 cell 을 사용해 보지 않아서 잘은 모르겠습니다.

    보통 x-gal 염색은 1시간에서 over night 처리 하기도 합니다.

    50mg을 가지고 두번밖에 못한다고 하셨는데 한번 실험할때 25ml씩 사용하시나요?

    한 슬라이드에 100-500ul 면 충분할텐데 

    많이 사면 살수록 시약값은 내려감니다. 한번 살때 충분한 양을 사시는 것도 실험비를 아끼는 방법입니다.

    만약 spectrophotometer 를 사용하신면 ONPG로 대체 하실수 있습니다.

    보통 staining 할때는 증발을 막기위해서 humid chember를 사용합니다.

     

    답이 ？는지 모르겠네요

    더 궁금 한게 있음 연락 주세요

     

    -------------------------------------질문-------------------------------------

    HS27 cell로 X-gal 염색을 진행하고 있는데
    X-gal 의 농도가 final 1mg/ml이 되게끔 제조하고 있습니다.

    염색 후 24시간 후에 관찰하는데 염색이 되긴 되는데 다른 논문들처럼 대다수의 세포가 염색되진 않습니다.

    농도를 늘릴까 싶은데 X-gal시약이 Sigma-B4252 50mg에 115,000원 하더군요.
    50mg이면 겨우 2번 실험할 양인데, 너무 가격이 비싼거 같습니다.

    혹시 다른 시약에서 대등한 결과를 얻으셨다면 시약 좀 추천해주세요.
    그리고 농도도 알려주세요.
    또, 염색되는 과정이 24hr이 걸려야되는 가요? 37도에서 24hr을 견디려면 염색약이 많아야 다음날까지 굳지않고 염색이 될텐데..

    여러 어려움이 있습니다. 실험해보신 분들께서 조언 좀 부탁드려요^^ 감사합니다.

    [staining solution]
    0.2M citric acid 3.7ml
    0.4M Na2HPO4 6.3ml
    20mg/ml X-Gal 1ml
    100mM potassium ferricyanide 1ml
    100mM potassium ferroctanide 1ml
    5M NaCl 600ul
    0.2M MgCl2 200ul
    D.W. 6.2ml

    신영인(akingpost) 2012-02-13

    답변 정말 감사합니다. 다시 한번 해보겠습니다^^

  • 답변

    김소라님의 답변

    2012-02-09
    • 0

     저는 HDF, MEF로 실험을 진행하였는데, 꽤 좋은 결과를 얻었습니다.

    시약 조성과 농도는 말씀하신 것과 동일하구요..

    저도 처음에는 생각보다 염색이 안되서 고민하던 차..(논문 참고 하였음)

    PH가 너무나도 중요하다는 결론을 내리게 되었습니다.

     

    우선 Citic acid 의 PH가 R.T에서 6.0인지 반드시 확인해 보시구요~

    이 조건에서 전 48h까지 staing 한적도 있습니다. (plate에는 뚜껑이 있어 이정도에서 증발의 우려는 그다지 없는것 같습니다.  예> 1ml /6well plate )

     

    이래도 염색이 잘 되지 않으신다면, citric acid bufer의 PH를 최대 5.5까지 낮춰 보세요.

    염색이 굉장히 잘 되는 조건이지만 염색되지 말아야할 세포까지도 염색이 될 수 있으니, staining 시간은 실험자 분께서 잘 맞추셔야 될것 같습니다. 최대 24h 이 넘어가면 안되요!)

    도움이 되셨길 바래요 ~^^

    -------------------------------------질문-------------------------------------

    HS27 cell로 X-gal 염색을 진행하고 있는데
    X-gal 의 농도가 final 1mg/ml이 되게끔 제조하고 있습니다.

    염색 후 24시간 후에 관찰하는데 염색이 되긴 되는데 다른 논문들처럼 대다수의 세포가 염색되진 않습니다.

    농도를 늘릴까 싶은데 X-gal시약이 Sigma-B4252 50mg에 115,000원 하더군요.
    50mg이면 겨우 2번 실험할 양인데, 너무 가격이 비싼거 같습니다.

    혹시 다른 시약에서 대등한 결과를 얻으셨다면 시약 좀 추천해주세요.
    그리고 농도도 알려주세요.
    또, 염색되는 과정이 24hr이 걸려야되는 가요? 37도에서 24hr을 견디려면 염색약이 많아야 다음날까지 굳지않고 염색이 될텐데..

    여러 어려움이 있습니다. 실험해보신 분들께서 조언 좀 부탁드려요^^ 감사합니다.

    [staining solution]
    0.2M citric acid 3.7ml
    0.4M Na2HPO4 6.3ml
    20mg/ml X-Gal 1ml
    100mM potassium ferricyanide 1ml
    100mM potassium ferroctanide 1ml
    5M NaCl 600ul
    0.2M MgCl2 200ul
    D.W. 6.2ml

    답변수정

     저는 HDF, MEF로 실험을 진행하였는데, 꽤 좋은 결과를 얻었습니다.

    시약 조성과 농도는 말씀하신 것과 동일하구요..

    저도 처음에는 생각보다 염색이 안되서 고민하던 차..(논문 참고 하였음)

    PH가 너무나도 중요하다는 결론을 내리게 되었습니다.

     

    우선 Citic acid 의 PH가 R.T에서 6.0인지 반드시 확인해 보시구요~

    이 조건에서 전 48h까지 staing 한적도 있습니다. (plate에는 뚜껑이 있어 이정도에서 증발의 우려는 그다지 없는것 같습니다.  예> 1ml /6well plate )

     

    이래도 염색이 잘 되지 않으신다면, citric acid bufer의 PH를 최대 5.5까지 낮춰 보세요.

    염색이 굉장히 잘 되는 조건이지만 염색되지 말아야할 세포까지도 염색이 될 수 있으니, staining 시간은 실험자 분께서 잘 맞추셔야 될것 같습니다. 최대 24h 이 넘어가면 안되요!)

    도움이 되셨길 바래요 ~^^

    -------------------------------------질문-------------------------------------

    HS27 cell로 X-gal 염색을 진행하고 있는데
    X-gal 의 농도가 final 1mg/ml이 되게끔 제조하고 있습니다.

    염색 후 24시간 후에 관찰하는데 염색이 되긴 되는데 다른 논문들처럼 대다수의 세포가 염색되진 않습니다.

    농도를 늘릴까 싶은데 X-gal시약이 Sigma-B4252 50mg에 115,000원 하더군요.
    50mg이면 겨우 2번 실험할 양인데, 너무 가격이 비싼거 같습니다.

    혹시 다른 시약에서 대등한 결과를 얻으셨다면 시약 좀 추천해주세요.
    그리고 농도도 알려주세요.
    또, 염색되는 과정이 24hr이 걸려야되는 가요? 37도에서 24hr을 견디려면 염색약이 많아야 다음날까지 굳지않고 염색이 될텐데..

    여러 어려움이 있습니다. 실험해보신 분들께서 조언 좀 부탁드려요^^ 감사합니다.

    [staining solution]
    0.2M citric acid 3.7ml
    0.4M Na2HPO4 6.3ml
    20mg/ml X-Gal 1ml
    100mM potassium ferricyanide 1ml
    100mM potassium ferroctanide 1ml
    5M NaCl 600ul
    0.2M MgCl2 200ul
    D.W. 6.2ml

    신영인(akingpost) 2012-02-13

    답변 정말 감사합니다. 다시 한번 해보겠습니다^^

목록
목록