2012-11-08
org.kosen.entty.User@2fa64c19
김정아(asdfg9528)
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TFA anions can neutralize or decrease the charges of the protonated analytes by forming strong ion pairs that are not dissociated during the ionization process.
논문의 일부분입니다.
무슨의미일까요?
그리고
LC 분석에서 이동상과 단백질(sample)와 정지상(C18) 의 상호작용이 어떻게 되나요?
- TFA
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답변 3
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답변
조윤환님의 답변
2012-11-08- 2
단백질이나 펩타이드의 LCMS 분석에서 TFA가 포함된 이동상이 사용되는 것을 흔히 발견할 수 있습니다. TFA는 이동상의 pH를 조절하거나 peak의 형태 또는 resolution을 개선할 목적으로도 사용됩니다. TFA에 의해 peak의 형태나 resolution이 개선 효과가 나타나는 이유는 TFA가 analyte와 ion pair를 형성하기 때문입니다. 즉 ion-pairing reagent로서 작용합니다. TFA를 사용하면 앞에서 언급한 효과를 얻을 수 있지만 peak의 intensity가 감소하는 현상이 LCMS에서 관찰되곤 합니다. 이럴 경우엔 TFA의 양을 줄이고 이를 대신하여 formic acid 또는 propionic acid를 넣어주면 peak intensity를 높일 수 있습니다. -
답변
조윤환님의 답변
2012-11-08- 2
첨부파일
답변을 등록하고 질문을 다시보니 아래 영어문장에 대한 답변이 조금 부족한듯 하여 추가 답변을 작성합니다. "TFA anions can neutralize or decrease the charges of the protonated analytes by forming strong ion pairs that are not dissociated during the ionization process." 보통 LC 분석에서 사용하는 역상컬럼의 경우 고정상 자체가 비극성도가 높기 때문에 분석 대상 성분의 극성이 낮을수록 컬럼의 고정상과 interaction이 커서 오래 머물고, 이온화된 화학종의 경우 극성이 높기 때문에 고정상과 제대로 interaction을 하지 못하고 금방 컬럼을 빠져나가 버리게 됩니다. "like dissolves like" 라는 원리가 적용되는 것으로 이해하시면 되겠습니다. 위 문장의 뜻은 TFA가 protonation된 analyte, 즉 양전하를 띠고 있는 analyte의 높은 극성을 TFA 음이온이 중화(약화) 시켜서 고정상과의 interation을 증가시키는 역할을 한다는 뜻으로 이해하실 수 있습니다. 펩타이드 같은 극성물질의 경우 peak의 후반부가 길게 끌리는 현상이 관찰되는데....TFA를 넣어주면 이러한 현상이 줄면서 peak의 모양이 좋아지는 것도 이런 맥락에서 이해할 수 있습니다. 펩타이드나 아미노산, 유기산 또는 아민류 화합물처럼 극성이 높은 물질은 역상컬럼과 충분한 상호작용을 하지 못하기 때문에 RT도 짧고 분리도가 낮은 것이 특징인데.... 이를 극복하기 위해 개발된 방법이 ion-pair chromatography입니다. 단백질이나 펩타이드 LCMS 분석에서 TFA를 사용하는 것은 ion-pair chromatography의 원리를 활용한 것이라고 볼 수 있겠습니다. 역상컬럼의 분리나 retention에 대해 더 설명드리고 싶지만 이야기가 길어지기 때문에 이만 줄입니다. -
답변
강광철님의 답변
2012-11-08- 0
TFA anions can neutralize or decrease the charges of the protonated analytes by forming strong ion pairs that are not dissociated during the ionization process. TFA음이온이 중화되거나,전하가 감소된다는내용이구요, 단백질과 같은 큰분자들은 C18의 긴 탄소 체인보다는 C8의 탄소 체인이 짧은 체인을 가긴 컬럼을 사용해서 분리합니다.