지식나눔

천연물 분획중에 질문 드립니다~!

안녕하세요. 지금 실험실에서 감초추출물로 분획중에 있습니다. 헥산부터 하고있는데 층 분리가 안됩니다. 물을 조금 더 넣어봐도 분리가 안됩니다. 용매 량은 물층은 1000ml, 헥산층은 950ml 입니다. 다른 사이트에 다른 질문 답변을 보니까 NaCl 수용액을 넣는다고 하였는데 이것을 넣게되면 왜 분리가되고 또 다른 영향을 미치지는 않는지 궁금합니다...
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답변 4
  • 답변

    조윤환님의 답변

    물층은 분리가 잘 되는데....헥산층이 깨꿋하게 분리가 되지 않을 경우 소금물을 넣으면 밀도차가 커지고 salting out효과에 의해 소수성 물질들의 유기 용매층에 대하 분배계수가 증가하는 효과가 발생합니다. 제 경우 유기용매와 수층의 분리가 잘 일어나지 않을 경우(특히 유기층이 클리어 하지 않을 경우) 다음의 몇 가지 방법을 사용해서 해결하곤 합니다. 1. 유기용매 층을 여과지에 통과시킵니다.(그냥 여과한다는 말이죠) - 대부분 조금 기다리면 분리가 됩니다. 2. 유기층을 희석한 소금물로 세척하여 층분리(가장 일반적인 방법) 3. 유기층에 소금물 포화용액을 소량 넣고 층분리(Na2SO4 같은 desiccant 사용전 실시하면 유기용매 층에 존재하는 물을 상당량 제거할 수 있어 효과적이고 층분리에도 효과가 좋습니다) 4. 여과지를 이용하는 방법 - 본 방법은 #1과는 비슷해 보이지만 원리가 전혀 다릅니다. 특수 처리된 여과지를 사용하기 때문입니다. 결과도 매우 훌륭 합니다. 유기층을 바로 농축해서 NMR을 찍어도 물 피크가 관찰되지 안을 정도니까요. 다만 비용이 좀 많이 든다는게 흠이죠. 이 외에 층분리가 잘 되지 않은 원인으로 생각 해볼 수 있는 것으로는 다음과 같습니다. 5. 천연물 추출시 흔히 사용하는 알콜계 용매 등이 잔존하는 경우 - azotropic distillation 등으로 잔존 용매를 완전히 제거 후 분획을 실시합니다. 6. 추출물의 물성으로 인해 깨끗히 분리되지 않는 경우 - 헥산 분획을 건너 뜁니다.
    물층은 분리가 잘 되는데....헥산층이 깨꿋하게 분리가 되지 않을 경우 소금물을 넣으면 밀도차가 커지고 salting out효과에 의해 소수성 물질들의 유기 용매층에 대하 분배계수가 증가하는 효과가 발생합니다. 제 경우 유기용매와 수층의 분리가 잘 일어나지 않을 경우(특히 유기층이 클리어 하지 않을 경우) 다음의 몇 가지 방법을 사용해서 해결하곤 합니다. 1. 유기용매 층을 여과지에 통과시킵니다.(그냥 여과한다는 말이죠) - 대부분 조금 기다리면 분리가 됩니다. 2. 유기층을 희석한 소금물로 세척하여 층분리(가장 일반적인 방법) 3. 유기층에 소금물 포화용액을 소량 넣고 층분리(Na2SO4 같은 desiccant 사용전 실시하면 유기용매 층에 존재하는 물을 상당량 제거할 수 있어 효과적이고 층분리에도 효과가 좋습니다) 4. 여과지를 이용하는 방법 - 본 방법은 #1과는 비슷해 보이지만 원리가 전혀 다릅니다. 특수 처리된 여과지를 사용하기 때문입니다. 결과도 매우 훌륭 합니다. 유기층을 바로 농축해서 NMR을 찍어도 물 피크가 관찰되지 안을 정도니까요. 다만 비용이 좀 많이 든다는게 흠이죠. 이 외에 층분리가 잘 되지 않은 원인으로 생각 해볼 수 있는 것으로는 다음과 같습니다. 5. 천연물 추출시 흔히 사용하는 알콜계 용매 등이 잔존하는 경우 - azotropic distillation 등으로 잔존 용매를 완전히 제거 후 분획을 실시합니다. 6. 추출물의 물성으로 인해 깨끗히 분리되지 않는 경우 - 헥산 분획을 건너 뜁니다.

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  • 답변

    이근하님의 답변

    혹시 실험실에 원심분리기가 있다면 분획물 전체를 원심분리해보세요 두 용매층이 극성과 비중차이가 확실하기 때문에 이것도 한 방법이죠
    혹시 실험실에 원심분리기가 있다면 분획물 전체를 원심분리해보세요 두 용매층이 극성과 비중차이가 확실하기 때문에 이것도 한 방법이죠

    답변 감사합니다~! ^^ 원심분리도 좋은 방법 같네요.. 원심분리기가 있긴하지만 분획물 전체를 돌리기엔 작은 원심분리기라서..ㅜ

  • 답변

    강광철님의 답변

    첨부파일

    Hexane은 매우 hydrophobic한 용매이므로 물 과는 섞이지 않고 층으로 분리됩니다. (물은 아래층, hexane은 밀도가 낮아서 윗층). 그리고 윗층에 추출물이 들어가 겠죠.. NaCl 포화 용액: 아마 추출하시고자 하는 물질이 계면활성제 역할을 해서 두 층이 잘 분리가 안되는것 같은데요.. NaCl을 쓰면, 표면장력이 약해져서, 분리가 더 잘 되며, 촉매 역할을 합니다..
    Hexane은 매우 hydrophobic한 용매이므로 물 과는 섞이지 않고 층으로 분리됩니다. (물은 아래층, hexane은 밀도가 낮아서 윗층). 그리고 윗층에 추출물이 들어가 겠죠.. NaCl 포화 용액: 아마 추출하시고자 하는 물질이 계면활성제 역할을 해서 두 층이 잘 분리가 안되는것 같은데요.. NaCl을 쓰면, 표면장력이 약해져서, 분리가 더 잘 되며, 촉매 역할을 합니다..

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    이홍섭님의 답변

    처음부터 열수 혹은 알콜 추출물을 수 분산하여 핵산으로 추출하면 가끔 그런 문제가 발생하기도 합니다. 어짜피 대강의 분획을 나누고 그 다음 차?로 분리하고자 한다면 전 1차 핵산 추출 시 추출액을 소량의 물로 분산시키고 최종 95% 메탄올이 되게 농도를 맞추고 핵산으로 추출하는 것을 권하고 싶네요. 95% 메탄올은 핵산과 섞이지 않습니다. 그렇게 하면 추출물의 성질로 에멀젼처럼 섞이는 증상은 확실히 줄어 듭니다. 단!! 이 방법으로 추출하면 물로 추출한 것과의 차이가 생깁니다. 이점 유의하시기 바랍니다.
    처음부터 열수 혹은 알콜 추출물을 수 분산하여 핵산으로 추출하면 가끔 그런 문제가 발생하기도 합니다. 어짜피 대강의 분획을 나누고 그 다음 차?로 분리하고자 한다면 전 1차 핵산 추출 시 추출액을 소량의 물로 분산시키고 최종 95% 메탄올이 되게 농도를 맞추고 핵산으로 추출하는 것을 권하고 싶네요. 95% 메탄올은 핵산과 섞이지 않습니다. 그렇게 하면 추출물의 성질로 에멀젼처럼 섞이는 증상은 확실히 줄어 듭니다. 단!! 이 방법으로 추출하면 물로 추출한 것과의 차이가 생깁니다. 이점 유의하시기 바랍니다.

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