2013-06-12
org.kosen.entty.User@2d9a8d73
이원길(oneman2000)
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제가 이번에 실험을 하게 될 실험이
stem cell을 배양하여 하는 실험입니다.
그런데 제가 아직 지방조직에서 stem cell을 추출하는 것을 배우지 못하였습니다.
그래서 많은 사람들께 물어볼려고 이렇게 글을 쓰게 됩니다.
지방조직에서 stem cell을 추출하고 계신 분이나, 하셨던 분들은
제발 방법 좀 알려 주세요
박사님은 알아서 method 를 찾아서 하라고만 하십니다.
부탁드립니다.
dldnjsrlf37@naver.com으로 방법 좀 보내주세요.
- stem cell
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답변 2
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답변
김종태님의 답변
2013-06-13- 5
지방에서 유래한 stem cell or stromal cell 은 일반적으로 중간엽에서 유래하였다고, adipose derived mesenchymal stem cell 로 알려져있습니다. 분리방법은 1. 지방조직과 2. 지방흡입 수술 후 나오는 지방으로 1번은 덩어리상태이고 2번은 액상과 비슷한 상태입니다. 1번방법은 지방조직을 5g 단위로 분리를 하면 좋습니다. 지방조직을 PBS or HBSS에 3번 wash하고 100mm dish에서 멸균해둔 메스로 죽처럼 될때까지 10분간 잘 다져줍니다. mincing 한다고 부릅니다. 그 다음 a-MEM 에 0.075% collagenase type1을 동량 5ml 넣어서 10ml pipet 으로 pippeting 해서 50mL tube로 옮겨줍니다. 37도씨에서 30분간 incubation 하는동안 10분에 한번씩 손으로 tapping 해줍니다. 반응후 collagenase 의 반응을 stop 시키기 위해서 a-MEM 10% FBS 배지를 10ml 채워주고 3000rpm 에서 10분 spin down 합니다. 아래쪽에 RBC 와 함께모인 cell pellet 을 20ml 배지로 suspension 후에 70~100um mash로 걸러준 후 100mm dish에 키우시면 됩니다. 2번방법은 1500rpm 에서 5분정도 spin down 하면 액체와 지방이 분리됩니다. 그러면 지방만 모아서 동일하게 진행하시면 됩니다. 참고하실만한 논문을 보내드립니다. 지방에서 분리하는 방법은 많이 알려져 있어서 쉽게 배울수 있습니다. 그리고 유튜브나 jove 라고 동영상으로도 찾으면 보실수 있으세요~ -
답변
서민수님의 답변
2013-06-20- 3
지방유래 줄기세포를 동물 (설치류)에서 추출하는 경우는 다음의 부분에서 추출합니다. 1. 암컷을 사용하는 경우 : mammary pad 즉 유선이 있는 부분에서 지방을 추출 2. 수컷을 사용하는 경우 : 부검하여 개복학 부고환 주위 지방에서 추출하는 경우 2번을 좀더 선호하며 이유는 지방을 조금 더 쉽게 채취가 가능하기 때문 입니다.