2013-11-05
org.kosen.entty.User@69e4a5e0
배점일(behonest)
- 1
안녕하세요.
다름 아니라, 항체 형광레이블링 관련해서 질문드립니다.
항체레이블링은 주로 아민기를 이용하게 되는데, 제가 레이블링할 항체의 항원 결합부위에 라이신이 있어서 이 방식을 이용하면 ab-ag 결합에 영향을 줄 것 같습니다.
다른 방법으로는 sulfhydryl 그룹에 conjugation하는 방법이 있는데, 힌지 부분의 disulfide를 깨트릴 가능성이 많다고 들었습니다. 그밖에 glycosylation되어있는 carbohydrate에 labeling하는 방법이 있던데, 자세한 정보를 찾지는 못했습니다.
간단히 요약해서 말씀드리면, 항원 결합에 영향을 주지 않는 항체 레이블링 방법(형광)에 대해 아시는 내용이 있으면 알려주세요^^ 감사합니다.
- 항체
- antibody
- labeling
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답변 1
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답변
배기현님의 답변
2013-11-06- 0
안녕하세요 항원 결합에 영향을 주지 않으면서
항체를 형광 물질로 레이블링하는 방법을 찾으시는군요.
아마도 Click chemistry를 이용하실 수 있을 것 같습니다.
여러 가지 방법이 있겠지만 대표적인 것은
Life Technologies 사의 SiteClick™ Antibody Labeling Kit입니다.
일반적으로 IgG와 같은 항체들의 heavy chain Fc domain에는
2개 정도의 N-linked glycan이 있다고 합니다.
이를 β-galactosidase와 β-galactosyl transferase (GalT) 효소를 이용하여
azide group으로 수식할 수 있습니다.
여기에 dibenzocyclooctyne (DIBO)로 수식된 형광 물질을 섞어주게 되면
Cu 이온 없이도 click 반응이 일어나면서 항체와 형광 물질이 공유 결합됩니다.
공유 결합 반응이 heavy chain에만 일어나기 때문에
항원-항체 결합에는 영향을 주지 않습니다.
더 자세한 설명은 아래 링크와 첨부 파일을 참고해보세요.
http://www.lifetechnologies.com/sg/en/home/life-science/cell-analysis/labeling-chemistry/protein-and-antibody-chemical-labeling/antibody-protein-labeling-kits/siteclick-labeling.html