지식나눔

박테리아에 유전자 deletion균주를 만드는 연구원입니다.

실은 유전자가 사라진 균주를 선별하는데 성공한 후

freezing후 vial을 소량 꺼내 test tube에 incubation하거나

plate에 streaking후 PCR을 통해 확인하면 band가 없습니다.
(PCR과정 자체는 아무 문제없습니다. control은 잘 나타나는 것을 확인했습니다.)
 
freezing vial자체에서 pcr을 떠보면 band가 나오는데 무슨 문제가 있을까요?

해결방안이 안보여서 이렇게 질문올려봅니다.
  • 박테리아
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
답변 1
  • 답변

    배정훈님의 답변

    gene deletion을 어떤 방법으로 했나요?
    single crossover integration방법으로 했다면 그리고 mutant가 매우 unstable하다면
    배양과정에서 intagration된 벡터가 제거된것만 살아남게 되어서 설명한 경우가 발생할 수 있습니다
    배양시에 selelction pressure를 높여주던지 아니면 double crossover 방법으로 deletion을 다시해보세요
    gene deletion을 어떤 방법으로 했나요?
    single crossover integration방법으로 했다면 그리고 mutant가 매우 unstable하다면
    배양과정에서 intagration된 벡터가 제거된것만 살아남게 되어서 설명한 경우가 발생할 수 있습니다
    배양시에 selelction pressure를 높여주던지 아니면 double crossover 방법으로 deletion을 다시해보세요
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