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이상후님의 답변
2014-02-24- 4
LC-MS/MS에서는 baseline to baseline, baseline to valley, valley to valley는 machine이 자동으로 계산해서 정량하는 방법이 아니라, 실험자가 mannual로 정량할때 나오는 용어들입니다.
사실 HPLC, GC와는 다르게 LC-MS/MS에서의 정량은 실험자가 PC에서 입력하는 숫자만으로 machine이 자동으로 계산하는 것이 가장 바람직한 방법입니다. 왜냐하면 mannual로 계산하게 되면 실제 샘플 peak과 noise peak를 정확하게 정량하는데 한계가 있기 때문이죠.
그럼에두 불구하고, 일반 실험에서는 상기 b-to-to, b-to-v, v-to-v 법을 종종 사용하는 경우가 있습니다. b-to-b는 말 그대로 피크와 피크사이가 명확하게 분리가 되었을 때, 샘플 피크가 시작하는 지점에서 끝나는 지점까지의 area(보통 intensity 또는 cps 로 표기됨)를 실험자가 지정해서 정량하는 방법이구, b-to-v는 하나의 샘플 피크가 샘플이 아닌 다름 피크와 중첩이 됐을 때, 샘플피크의 시작점(완전히 분리가 된)에서 끝나는 지점(비샘플피크와 중첩이 된)이 마치 산과 산 사이의 계곡과 같다고 해서 샘플 피크와 비샘플 피크가 중접되기 시작하는 지점까지 실험자가 정량구간을 설정하여 정량하는 방법입니다.
마지막으로 v-to-v는 샘플피크와 비샘플피크과 시작 및 끝 점 모두 중첩이 될 때, 계곡점이 시작하는 지점에서 끝나는 계곡점까지 실험자가 정량구간을 설정하여 정량하는 방법입니다.
앞서 설명한 것 처럼, LC-MS/MS에서는 가급적 mannual로 정량하시지 말고 auto로 정량하는게 결과으 신뢰성을 확보한다는 면에서 권장하는 바입니다. auto 정량은 noise threshold와 sample peak threshold를 실험자가 입력해 주면 machine이 자동으로 area 얼마 이상인 peak만 정량하므로 결과값에 정확성이 확보되게 됩니다. 특히, 결과값의 신뢰도를 필요로 하는 검사나 외부 audit 기관에 의한 인증관리가 필요한 경우는 특히 mannual 정량법은 피해야 될 것으로 생각됩니다. -
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조윤환님의 답변
2014-02-24- 3
반갑습니다.
integration 방식은 사실 어느 분석법이든 동일합니다.
분석에 상관 없이 신호를 어떻게 처리하느냐의 문제이기 때문입니다.
HPLC, GC처럼 신호의 면적을 측정한 값을 데이터로 사용하는 분석법이면 모두 동일한 방식이 적용됩니다. 때문에 아래 HPLC의 예를 참고하시면 되겠습니다.
1. http://www.dionex.com/en-us/webdocs/77494-PO-HPLC-LPN2297-01-Chrome.pdf
2. http://www.chromatographyonline.com/lcgc/data/articlestandard/lcgc/152006/319792/article.pdf
보통 결과 리포트에서 RT, area, % 등이 표시되는데, 사용자가 integration type을 표시하도록 설정할 수 있습니다. 이때 VV, BB, BV 등으로 표시되는데 BB는 baseline to baseline, valley to valley 등을 나타냅니다. integration option은 여러가지가 있는데, 상황에 맞도록 사용하는 것이 중요합니다. 오류를 줄이기 위한 것이니까요.
자세한 내용은 위 참고 자료를 보시길. -
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신동협님의 답변
2014-02-25- 2
1. 우선 integration mode는 peak 면적값을 구하여 정량하는 것을 말합니다.
LC는 보통 standard 물질과 미지시료의 retension time을 비교하여 그 물질이 맞는지
그 양이 얼마나 되는지 확인할 때 쓰이는데,
다른 농도, 적어도 3개 이상의 stadard 시료(예룰 들면 1ppm, 5ppm, 10ppm 등)로 부터
calibration curve(y=ax+b)를 얻어 미지시료의 정량적인 값을 구하는 것입니다.
2. 이때 peak 모양이 대칭모양으로 나오는 것이 이상적인데
tailing이 발생하거나 double peak 등으로 인해 비대칭으로 나오는 경우
peak 시작과 끝은 어디로 할 것인지 설정하는 것을 base to base라 합니다.
기본적으로 standard 물질이 대칭모양으로 나와야 하며
그렇지 않을 경우 다른 column을 사용해보거나 eluent, flow rate 등
조건을 변경해보셔야 합니다.
3. valley는 측정한 method가 해당 샘플에 맞는 지를 의미합니다.
위에서 말씀드린 것처럼 peak 모양이 대칭인지,
다른 논문이나 기타 자료에서 찾아 봤을 때 해당 샘플의 retension time이 맞는지
등을 확인하는 것입니다.