2014-03-21
org.kosen.entty.User@73071782
정기백(nabluedust)
- 1
안녕하세요.
Bioconjugation 및 Covalent coupling 관련하여 공부하고 있는 학생입니다.
Avidin- biotin 과 같은 strong한 결합을 하는 cross-lingker에 대하여 공부를 하고 있습니다.
공부 및 실험 중에 궁금한 점이 생겨서 찾던 중에 잘 모르겠는 점이 있어서
이렇게 질문을 드립니다.
단백질, 예를들면 항체의 경우, -CHO 기가 2개가 Active site가 아닌 아래쪽
양면에 한 개 씩 위치한 것으로 알고 있습니다. 그곳에 -NH 기를 가진 biotin을
반응시킬 경우 (Schiff base) 항체 양쪽에 biotin이 하나씩 붙어서 총 2개가 될 텐데
그럴경우 항체가 Biotin 2개를 이어주는 linker역할을 하게되고,
만약 avidin-biotin 결합을 중개로 하여 항체를 특정 particle에 modify하고 싶을 때,
avidin이 부착된 particle 간 aggregation이 일어날 것 같습니다.
이러한 응집현상을 막기위하여 1개의 항체에 1개의 biotin만이 붙도록 하고 싶은데
어떻게 해야할 지 잘모르겠어서 질문을 드립니다..
* 시중에 판매하는 Biotinylated antibody 경우에 biotin이 한 개만 붙어있는 것인지 궁금합니다.
* 한 개만 붙어있는 것이라면 그 붙이는 원리에 대해서도 알 수 있으면 좋을 것 같습니다!
감사합니다. 좋은하루되세요!!
Bioconjugation 및 Covalent coupling 관련하여 공부하고 있는 학생입니다.
Avidin- biotin 과 같은 strong한 결합을 하는 cross-lingker에 대하여 공부를 하고 있습니다.
공부 및 실험 중에 궁금한 점이 생겨서 찾던 중에 잘 모르겠는 점이 있어서
이렇게 질문을 드립니다.
단백질, 예를들면 항체의 경우, -CHO 기가 2개가 Active site가 아닌 아래쪽
양면에 한 개 씩 위치한 것으로 알고 있습니다. 그곳에 -NH 기를 가진 biotin을
반응시킬 경우 (Schiff base) 항체 양쪽에 biotin이 하나씩 붙어서 총 2개가 될 텐데
그럴경우 항체가 Biotin 2개를 이어주는 linker역할을 하게되고,
만약 avidin-biotin 결합을 중개로 하여 항체를 특정 particle에 modify하고 싶을 때,
avidin이 부착된 particle 간 aggregation이 일어날 것 같습니다.
이러한 응집현상을 막기위하여 1개의 항체에 1개의 biotin만이 붙도록 하고 싶은데
어떻게 해야할 지 잘모르겠어서 질문을 드립니다..
* 시중에 판매하는 Biotinylated antibody 경우에 biotin이 한 개만 붙어있는 것인지 궁금합니다.
* 한 개만 붙어있는 것이라면 그 붙이는 원리에 대해서도 알 수 있으면 좋을 것 같습니다!
감사합니다. 좋은하루되세요!!
- Bioconjugation
- Covalent coupling
- aggregation
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 1
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답변
이호진님의 답변
2014-03-25- 0
제가 항체에 대해서는 잘 모르고요.
일반적으로 단백질에 Biotinylation 하는 방법을 설명 드릴께요.
제가 주로 사용했던 방법은 단백질의 N-terminal에 biotinylation 시키는 것입니다.
시중에는 다양한 Biotinylated conjugated agent가 나와 있습니다.
http://www.piercenet.com/product/ez-link-sulfo-nhs-biotin-biotinylation-kits
문제는 biotin conjugated agent가 단백질의 N-말단기에만 반응하는 것이 아니라, 일차 아민기가 있는 라이신(Lys)에도 반응할 수 있다는 것입니다. pKa가 단백질의 N-말단기와 Lys가 다름으로 pH를 낮춰서 반응을 일으킵니다. 반응 속도는 회사마다 다른 이야기를 하기는 하지만, 1분에서 1시간 내에 반응이 끝납니다.
또 다른 방법은 disulfide bond를 이용하는 방법입니다. 단백질에 Cys 아미노산을 원하는 위치에 도입한 후에, 황 원자과 이중결합을 할 수 있도록 하는 방법인데요. Biotin-S 로 최근에 문헌에서 본 방법입니다. 이 방법을 사용하면, 특이성이 좋습니다.
http://www.innovabiosciences.com/antibody-labeling-kits/biotin-streptavidin/lightning-link-biotin.html?gclid=CPaPlsvbrb0CFUVp7Aode1sAFQ
Avidin-Biotin 결합이 강하고, 특이성이 있어서 다양한 방법들이 연구되었습니다.
도움이 되시길 바라며..