2014-04-24
org.kosen.entty.User@2a2d556c
김승우(nokjun)
- 1
안녕하세요
단백질 분해효소 활성도 실험중에 궁금사항이 두가지가 있어서 질문합니다.
효소액 1㎖를 시험관에 취하고 미리 30℃로 예열시킨 0.6% casein용액 5㎖를 가하여 잘 흔든 후 정확히 10분간 항온수조 내에서 반응 시킨다. 곧 0.4M trichloroacetic acid 5㎖를 넣어서 흔들고 반응을 중지시킨다. 다시 항온수조 내에 약 30분간 방치한다.
침전의 생성이 완료되면 시험관위에 소형(직경 3㎝정도)의 깔 때기를 씌우고 경질여지(직경 6㎝정도)를 사용하여 여과한다.
여액 2㎖를 시험관에 취하여 0.55M Na2CO3용액 5㎖와 Folin 시약(시약을 증류수로 3배 묽게 한 것) 1㎖를 넣어서 흔든 후 30℃에서30분간 방치한다. 이 액에 대하여 660㎚의 파장에서 흡광도(O.D.)를 측정한다.
별도의 실험으로 L-tyrosine을 여러 가지의 농도로 용해시킨 용액에 대하여 같은 방법에 의한 측정을 행하고, 여기에서 작성한 표준곡선 으로부터 앞에 기술한 실험에 의하여 얻어진 측정치에 대한 tyrosine량을 계산한다. 이것을 E㎍으로 한다. 대조로서 효소액 1㎖에 0.4M trichloroacetic acid 5㎖를 가한다. 여기에 0.6% casein 용액 5㎖를 가한 것에 대하여 같은 방법으로 측정한 tyrosine량을 B㎍으로 한다.
위와 같이 실험을 하고 있습니다. 그런데 대조군을 실험할때 효소엑에 0.4M trichloroacetic acid 5㎖을 가하고 0.6% casein 용액 5㎖를 가했는데, 실험보다 흡광도가 더 높게 나오는 문제가 있던데 정확히 용액을 섞는 순서와 시간을 알고 싶습니다.
두 번째로는, 나중에 결과를 계산하는데 (E-B)*11/2*1/10*희석배수 가 공식인데 여기서 나오는 숫자들이 어디서 나왔는지 궁금합니다. 그리고, 마지막에 이렇게 계산한 그 값의 단위도요
감사합니다.
단백질 분해효소 활성도 실험중에 궁금사항이 두가지가 있어서 질문합니다.
효소액 1㎖를 시험관에 취하고 미리 30℃로 예열시킨 0.6% casein용액 5㎖를 가하여 잘 흔든 후 정확히 10분간 항온수조 내에서 반응 시킨다. 곧 0.4M trichloroacetic acid 5㎖를 넣어서 흔들고 반응을 중지시킨다. 다시 항온수조 내에 약 30분간 방치한다.
침전의 생성이 완료되면 시험관위에 소형(직경 3㎝정도)의 깔 때기를 씌우고 경질여지(직경 6㎝정도)를 사용하여 여과한다.
여액 2㎖를 시험관에 취하여 0.55M Na2CO3용액 5㎖와 Folin 시약(시약을 증류수로 3배 묽게 한 것) 1㎖를 넣어서 흔든 후 30℃에서30분간 방치한다. 이 액에 대하여 660㎚의 파장에서 흡광도(O.D.)를 측정한다.
별도의 실험으로 L-tyrosine을 여러 가지의 농도로 용해시킨 용액에 대하여 같은 방법에 의한 측정을 행하고, 여기에서 작성한 표준곡선 으로부터 앞에 기술한 실험에 의하여 얻어진 측정치에 대한 tyrosine량을 계산한다. 이것을 E㎍으로 한다. 대조로서 효소액 1㎖에 0.4M trichloroacetic acid 5㎖를 가한다. 여기에 0.6% casein 용액 5㎖를 가한 것에 대하여 같은 방법으로 측정한 tyrosine량을 B㎍으로 한다.
위와 같이 실험을 하고 있습니다. 그런데 대조군을 실험할때 효소엑에 0.4M trichloroacetic acid 5㎖을 가하고 0.6% casein 용액 5㎖를 가했는데, 실험보다 흡광도가 더 높게 나오는 문제가 있던데 정확히 용액을 섞는 순서와 시간을 알고 싶습니다.
두 번째로는, 나중에 결과를 계산하는데 (E-B)*11/2*1/10*희석배수 가 공식인데 여기서 나오는 숫자들이 어디서 나왔는지 궁금합니다. 그리고, 마지막에 이렇게 계산한 그 값의 단위도요
감사합니다.
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 1
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답변
이재연님의 답변
2014-04-25- 0
1. 정확이 알 수 없으나, 시험군과 동일하게 여과하여 전과정 수행했는지 기질을 잘 용해 시켰는지검토
2. 1분당 생성된 tyrosine양이 unit defintion이므오 이렇게 계산. Mg, ug, mmol 등으로 정의에 따라
계산달라집니다.