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지식나눔

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Rat liver hepatocyte isolation buffer관련 질문 올립니다.

2015-09-07 org.kosen.entty.User@1fce5e0a 이호용(kolhy123)
  • 2
대게가 two step collagenase 방법을 사용해서 실험하는 데요 대게의 논문에서 0.5mM EGTA buffer를 사용해서 실험을 진행하는데 현재 실험이 0.5mM EGTA로는 혈액제거가 잘 되지 않아서 1mM EGTA로 농도를 2배 가량 높여서 실험을 진행 하고자 합니다. 이렇게 농도를 2배 올려도 큰 문제가 없는지 궁금하여 질문 올립니다.
  • Rat
  • hepatocyte
  • isolation
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답변 2
  • 답변

    김제현님의 답변

    2015-09-11
    • 1
    예전의 경험으로 짧게 답 합니다.
    1mM EGTA으로 해도 되지만 0.5mM EGTA이 큰 문제일거라고 생각 되지 않습니다.
    우선 충분한 양의 buffer로 perfusion 하면 Liver의 색이 완연히 바뀌는것을 확인 하실 수 있습니다.
    그리고 collagenase 쓰시면 됩니다.
    EGTA 보다 perfusion할때 혈관을 잘 찾아서 하시는것이 더 중요하리라 봅니다.
    답변수정
    예전의 경험으로 짧게 답 합니다.
    1mM EGTA으로 해도 되지만 0.5mM EGTA이 큰 문제일거라고 생각 되지 않습니다.
    우선 충분한 양의 buffer로 perfusion 하면 Liver의 색이 완연히 바뀌는것을 확인 하실 수 있습니다.
    그리고 collagenase 쓰시면 됩니다.
    EGTA 보다 perfusion할때 혈관을 잘 찾아서 하시는것이 더 중요하리라 봅니다.
    등록된 댓글이 없습니다.
  • 답변

    서준배님의 답변

    2016-04-17
    • 1
    perfusion 하실때 바늘을 Portal vein 쪽으로 찌르시나요?
    ICV 로 한번 해보세요. 
    ICV 에 바늘을 찌르고 펌프를 켠 다음 Portal vein 을 자르면 자르자 마자 간의 색깔이 바뀌는 것을 눈으로 확인 하실 수 있습니다.
    참고로 저는 마우스를 가지고 실험을 하고 있습니다.
    답변수정
    perfusion 하실때 바늘을 Portal vein 쪽으로 찌르시나요?
    ICV 로 한번 해보세요. 
    ICV 에 바늘을 찌르고 펌프를 켠 다음 Portal vein 을 자르면 자르자 마자 간의 색깔이 바뀌는 것을 눈으로 확인 하실 수 있습니다.
    참고로 저는 마우스를 가지고 실험을 하고 있습니다.
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