2015-09-24
org.kosen.entty.User@47b61b90
황철환(hch1013)
- 4
안녕하세요.
사람 혈액에서 LPS를 분리 하여 LAL test로 검출하고자 합니다.
원심분리기를 통해 PRP(platelet rich plasma)를 추출하여 검사하는 경우가 있던데
더하여 plasma에 열처리를 하던데 그 이유가 혹시 plasma에 LAL inhibitor가 존재하여
그것을 제거하기 위함인가요?
맞다면, 열처리 하지 않고 원심분리기를 사용하지 않고 LPS를 검출할 수 있는 방법은 없을까요?
예를 들어 membrane필터로 혈구,LAL inhibitor 등을 거르고 LPS만 통과시킨다거나 반대로 LPS만 남긴다거나 하는 방법은 없을까요
있다면 보통 어떤 필터를 사용하는지 궁금합니다.
LPS binding protein (LBP), Polymixin B 등을 사용하기도 하던데 binding 한 결합체는 혈액에서 또 어떻게 걸러내야 할까요...결국 항체를 사용해야 하나요?
아시는 부분만이라도 답변 부탁드립니다.
감사합니다.
사람 혈액에서 LPS를 분리 하여 LAL test로 검출하고자 합니다.
원심분리기를 통해 PRP(platelet rich plasma)를 추출하여 검사하는 경우가 있던데
더하여 plasma에 열처리를 하던데 그 이유가 혹시 plasma에 LAL inhibitor가 존재하여
그것을 제거하기 위함인가요?
맞다면, 열처리 하지 않고 원심분리기를 사용하지 않고 LPS를 검출할 수 있는 방법은 없을까요?
예를 들어 membrane필터로 혈구,LAL inhibitor 등을 거르고 LPS만 통과시킨다거나 반대로 LPS만 남긴다거나 하는 방법은 없을까요
있다면 보통 어떤 필터를 사용하는지 궁금합니다.
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- LPS
- endotoxin
- 내독소
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 4
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답변
배소현님의 답변
2015-10-08- 3
단지 sample 내의 LPS 등 endotoxin을 제거하기 위한 목적이라면, 첨부해 드리는 column등을 구입해서 사용하시면 될 것 같습니다. 여러 해 전에 이와 비슷한 column을 사용해서 sample 내의 endotoxin을 제거한 적이 있는데, 효과는 괜찮았습니다. -
답변
이상후님의 답변
2015-09-30- 2
LPS는 매우 음이온성이구 소수성 성질이 강해서 혈중 수 많은 인자들과 결합하게 됩니다. 그런데 시중에 시판되는 LPS assay kit가 heat inactivation 과정을 거치는 프로토콜을 가지고 있습니다. 만약 heat inactivation이 없다면 워낙 결합력이 강해서, 그리고 효소 저해제 또는 활성제로 작용하여 assay에 간섭효과를 주기 때문입니다. 아마 현재까지 밝혀진 기술로는 heating없이 LPS만 선택적으로 분리 및 검출하기는 힘들 것으로 보입니다. Binding한 LPS는 digestion을 통해 면역 검사법을 이용하면 특별히 거르지 않더라도 측정은 됩니다. 다만 워낙 간섭효과가 클 경우에는, solid-phase extraction 같은 추출법을 적용하기도 합니다.
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답변
성학모님의 답변
2015-10-05- 2
LAL test를 함에 있어 혈액은 2가지 경우로 양면성을 가지고 있습니다.
첫째, 혈액중 antitrombin III는 일반적으로 트롬빈 효소가 피브리노겐을 피브린으로 전환하여 겔화시키는 것을 억제합니다. 겔화반응이 일어나는 LAL test에 영향을 미치는 것으로 확인되었습니다. 열처리를 통해 불활성화가 필요합니다.
둘째, 혈액중 피브리노겐이 있어 LAL 반응시 함께 겔화되어(내인성 혈액응고도 동반됨) 과잉결과를 초래할수 있습니다. 열을 가하면 응고되어 덩어리가 형성됩니다. 하지만 이때 LAL 성분도 함께 제거될수 있습니다. 따라서 구연산 나트륨이나 glycine을 첨가하여 침전으로 분리한후 LAL test를 진행할수 있습니다.
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답변
성학모님의 답변
2015-10-10- 2
baserun님이 의견을 주신 resin 사용검토를 추천드립니다. 제가 QC현장에서 예비실험을 해본 적이 있는데 적절하게 찾아주셨네요.
단 실험 조건에 따라 결과가 다를 수도 있음을 유의하여 실험설게가 필요합니다. 즉 필요에 따라 spiking test와 cleaning validaton을 실시하면 좋을 듯합니다. 즉 검체와 동일한 용액에 일정용량의 endotoxin을 첨가하고 resin을 통과시킵니다. 이후 세척액을 통과하여 결합된 LAL을 떼어냅니다. 이때 통과된 용액 전체, 세척액 전체를 수집한 후 각 용액에 대해 LAL test를 진행합니다.
결과전후로 통과전대비 통과후액 LAL값이 '0'이고, 세척액 LAL값이 통과전과 거의 동일하다면 resin의 성능 또는 조건이 부합한다고 볼수 있습니다. 그렇지 않을 경우 별도의 검증실험이 요구됩니다. 상세한 protocol이 필요하시다면 의견주세요.
네 컬럼 추천 감사합니다^^