2015-11-04
org.kosen.entty.User@3c92f4ec
김주혁(kjh5703)
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현재 Live cell 관련 실험으로 논문을 찾았는데
논문에서 Hoechst를 쓰더군요.
DAPI를 대용으로 쓸지 고민 중인데 둘 간의 차이를 알려주시면 고맙겠습니다.
논문에서 Hoechst를 쓰더군요.
DAPI를 대용으로 쓸지 고민 중인데 둘 간의 차이를 알려주시면 고맙겠습니다.
- Hoechst 33342
- DAPI
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답변 2
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답변
이배훈님의 답변
2015-11-04- 1
살아 있는 세포는 dapi 보다 독성이 덜한 hoechst를 씁니다. 그리고 보다 쉽게 살아 있는 세포막을 투과하는 hoechst(ethyl 그룹으로 인해)를 사용합니다. dapi는 주로 fixed과 permeable 시킨 세포 핵을 stain하는데 사용합니다. (하지만 고농도의 dapi도 살아있는 세포막을 투과하여 stain시킵니다.) -
답변
이승준님의 답변
2015-11-06- 1
앞서 말씀 주신 것과 같이 Hoechst dye는 DAPI 보다 독성이 덜해서 staining 된 cell의 viability가 더 높습니다. 그래서, 주로 살아 있는 세포를 staining하는 데 쓰입니다. 또한, Hoechst 33342는 flow cytometry로 stem cell-like cell들이 Hoechst 33342 dye efflux를 활발히 하는 성질을 이용하여 (ABC pump), side population으로 sorting할 때 사용되기도 합니다.
반면, Fixation된 cell을 immunocytohemestry로 staining할 경우, nucleus 염색을 위해 permeabilzed 과정을 거친 후 DAPI로 주로 staining하는 실험들을 합니다.
실험의 목적에 따라 nucleus를 staining 하는 다양한 reagent를 사용할 수 있을텐데요. Live cell을 staining함으로써 cell viability를 보고자 하는 것이라면, 흔히 cell counting 할 때, 사용하는 trypan blue가 있겠구요(죽은 세포는 ATP를 이용한 efflux를 못해서 푸르게 염색된 채로 남아 있음). 반대 급부로 PI, 7-AAD staining을 통해 dead cell을 counting하는 것도 하나의 방법일 수 있을 것 같습니다.
실험 목적에 대한 정보가 더 있으면, 좀 더 정확한 방법들에 대해 말씀드릴 수 있을 것 같은데, 두서없는 설명이 되었군요.