2015-12-15
org.kosen.entty.User@11e9430c
김정호(qpt9838)
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제가 지금 영린기기 HPLC를 사용하고 있구요
컬럼은 C18 SHISEIDO 사용하고 있는데
용매는 ACN : 25 mM Sodium acetate buffer = 20:80 으로 사용하고 있는데요
용매가 염이 생길수 있는 버퍼라서 세척에 주의해야 되는데, 오랜만에 꺼내서 썻는데 압력이 너무 높게 나오더라구요. 아무래도 컬럼 안에 염이 생긴거 같아서 이걸 세척하는 방법을 알고 싶습니다.
구글에 찾아보니깐 물 100% 0.5 ml/min로 흘리고 ACN 100%로 흘려서 세척하라고 하는데 이게 맞나요?? 아니면 다른 방법이 있으면 알고 싶습니다.
컬럼은 C18 SHISEIDO 사용하고 있는데
용매는 ACN : 25 mM Sodium acetate buffer = 20:80 으로 사용하고 있는데요
용매가 염이 생길수 있는 버퍼라서 세척에 주의해야 되는데, 오랜만에 꺼내서 썻는데 압력이 너무 높게 나오더라구요. 아무래도 컬럼 안에 염이 생긴거 같아서 이걸 세척하는 방법을 알고 싶습니다.
구글에 찾아보니깐 물 100% 0.5 ml/min로 흘리고 ACN 100%로 흘려서 세척하라고 하는데 이게 맞나요?? 아니면 다른 방법이 있으면 알고 싶습니다.
- HPLC
- C18 column 컬럼
- 세척
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 3
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답변
김용규님의 답변
2015-12-15- 2
C18과 같은 reversed phased columns은 아래와 같은 용매와 볼륨을로 세척 가능합니다.
20 column volumes of water/acetonitrile (95:5 v/v)
20 column volumes of acetonitrile
5 column volumes isopropanol
20 column volumes hexane
그리고 mobile phase로 re-equilibirate 하시면 됩니다.
salt가 많이 생긴 경우라면 일반적으로 물을 많이 포함하고 있는 용매로 씻어주는데
100% 물의 경우 RP column에 손상을 줄 수 있기 때문에 추천되지는 않고
20 column volumes of water/acetonitrile (95:5 v/v)를 사용해보시기 추천합니다. -
답변
조윤환님의 답변
2015-12-18- 2
컬럼세척에 대한 질문을 많이 받게 됩니다.
게시판에 이미 많은 답변이 등록되어 있으므로 검색해서 읽어보시는 것이 좋겠습니다.
좋은 답변을 이미 받으셨지만 개인적인 생각은 위 답변의 첨부파일을 확인하시는 것이 좋겠습니다.
첫번째 답변은 세척방법 보다는 컬럼복원 방법 입니다. 초심자 입장에서 보면 오히려 컬럼을 손상시킬 가능성이 높습니다.
ACN, IPA, n-Hexane으로 세척하면 완충용액을 사용했었기 때문에 미리 충분히 세척이 되지 않은 상태에서 실시했을 경우 컬럼 내부에 염석출이 일어나서 컬럼이 손상됩니다. 5% ACN 수용액으로 세척하는 방법은 압력이 너무 높아져서 컬럼손상을 초래할 수 있으므로 주의를 요합니다.
보통 자주 사용하는 역상컬럼은 ACN(또는 MeOH):물= 50:50 혼합액으로 세척하면 무리가 없습니다. 보통 관리차원에서 흔히 사용하는 방법 입니다.
장기비사용이 예상되는 컬럼은 관리차원의 세척을 시행한 후에 컬럼메뉴얼에 명시되어 있는 보관액으로 세척한 후에 보관하시기 바랍니다.
복원용 세척은 컬럼 오염물질을 제거하기 위한 것으로 최후의 방법 입니다. 최악의 경우 컬럼 폐기를 각오한 상태에서 실시 합니다. 이것 또한 관리적 세척을 충분히 실시한 상태에서 해야하고, 컬럼메뉴얼에 명시된 방법으로 해야 합니다.
HPLC 컬럼은 사용보다 관리가 더 중요 합니다. 고가의 컬럼을 한번 실수로 잃을 수 있기 때문이죠. 때문에 사용전에 컬럼메뉴얼을 숙지하는 것이 중요합니다. 사용 가능한 용매의 종류, pH, 압력, 온도의 범위 내에서 사용해야 컬럼을 보호할 수 있기 때문이죠.
도움이 되셨길. -
답변
김동현님의 답변
2015-12-18- 1
혹시나 도움이 될까 싶어 일반적인 역상 컬럼 관리법에 대한 문서를 첨부합니다.