2016-01-25
org.kosen.entty.User@7100b908
김주동(syncn310)
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안녕하세요~ 이번에 특정 질환 환자에서 macrophage를 대상으로 처음으로 실험을 진행해 볼려고 하는 학생입니다.
환자 sample을 가지고 실험을 진행하는 특성상 혈액샘플에 국한되어서 실험을 진행하여야 하는데요~논문을 읽어봤는데 대부분이 혈액에서 PBMC를 분리한 후 거기서 다시 monocyte를 얻고 그렇게 얻어진 monocyte를 macrophage로 분화하는 방법을 사용하던데요~
이러한 방법이 아닌 그냥 다이렉트하게 PBMC를 분리한 후 거기서 해당 Ab를 염색하여 macrophage를 확인하는 것은 불가능 한건가요?
예를 들어 PBMC에서 CD4를 염색해서 FACS로 간단히CD4+ T cell을 보는 방법 처럼요.... (macrophage의 경우 CD14, CD68, CD11b 등이 있겠네요....)
여건상 sorting과 분화를 위한 long culture는 조금 힘든 상황이어서 PBMC 분리 후 바로 확인을 하고 싶은데 방법을 알고 계신분이 계시다면 도움 부탁드리겠습니다.
p.s : macrophage는 blood에서 아예 존재하지 않는 cell인가요? 일반적으론 monocyte가 손상된 조직으로 들어가서 거기서 macrophage로 분화된다고 알고 있습니다. 그렇다면 macrophage는 혈액내에는 존재하지 않는 건가요? 만약 그렇다면 위의 제 질문은 의미가 없겠네요~ㅜㅜ
환자 sample을 가지고 실험을 진행하는 특성상 혈액샘플에 국한되어서 실험을 진행하여야 하는데요~논문을 읽어봤는데 대부분이 혈액에서 PBMC를 분리한 후 거기서 다시 monocyte를 얻고 그렇게 얻어진 monocyte를 macrophage로 분화하는 방법을 사용하던데요~
이러한 방법이 아닌 그냥 다이렉트하게 PBMC를 분리한 후 거기서 해당 Ab를 염색하여 macrophage를 확인하는 것은 불가능 한건가요?
예를 들어 PBMC에서 CD4를 염색해서 FACS로 간단히CD4+ T cell을 보는 방법 처럼요.... (macrophage의 경우 CD14, CD68, CD11b 등이 있겠네요....)
여건상 sorting과 분화를 위한 long culture는 조금 힘든 상황이어서 PBMC 분리 후 바로 확인을 하고 싶은데 방법을 알고 계신분이 계시다면 도움 부탁드리겠습니다.
p.s : macrophage는 blood에서 아예 존재하지 않는 cell인가요? 일반적으론 monocyte가 손상된 조직으로 들어가서 거기서 macrophage로 분화된다고 알고 있습니다. 그렇다면 macrophage는 혈액내에는 존재하지 않는 건가요? 만약 그렇다면 위의 제 질문은 의미가 없겠네요~ㅜㅜ
- macrophage
- blood
- human
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 2
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답변
장성재님의 답변
2016-01-26- 3
질문자께서는 질문을 던지셨지만 답까지 이미 알고 계신 듯 합니다 (p.s의 내용이 맞습니다).
말초혈액에서 CD14+ monocyte를 분리하는 법은 이미 알고 계시겠지만 참고문헌을 첨부합니다.
분화된 macrophage (microglia, dendritic cell, kuffer cells etc.)를 직접 얻으시려면 조직에서 분리 배양하셔야 합니다.
참고로 조언을 드리면 환자의 혈액을 이용하여 바로 실험을 진행하시기 보다는 macrophage로 분화 가능한 monocyte cell line을 이용하여 예비실험을 거치신 후 본 실험을 진행하시기 바랍니다. -
답변
김주동님의 답변
2016-01-26- 1
감사합니다. 역시 걱정했던 부분이 맞았군요~ 좀 더 다른 디자인으로 접근해야 할 것 같네요~^^ 도움 주셔서 감사합니다~^^