2016-05-06
org.kosen.entty.User@64a2d80a
조재형(jh5086)
- 2
안녕하세요.
대장균을 이용하여 재조합 단백질을 만들고 이를 화장품 원료로 적용코자 하는 연구원입니다.
다름이 아니라 현장에서 보통 어떤 방법으로 endotoxin 물질 제거 방법을 알고 싶습니다.
보통 화장품용 단백질 원료들의 COA를 보면 endotoxin level이 1EU/ug이하이던데...
완벽하게 제거를 해야 하는것인지도 궁금하고 저정도 level이면 spec in으로 간주할 수 있는것인지도 궁금합니다
실험실에서야 일반 kit를 구매하여 사용할 수 도 있겠고 또는 Triton x-114와 같은 polymeric detergent를 사용할 수도 있을 거라 생각됩니다.
파일롯이나 실제 생산에 있어서 단백질내에 존재하는 LPS와 같은 endotoxin을 위와 같은 방법으로 제거를 진행하는지 궁금합니다.
down stream 공정이다 보니 단백질의 loss가 없으며 공정 단가가 낮은 방법을 찾고 있습니다.
혹시라도 이분야의 전문가가 있으시면 조언좀 부탁드리겠습니다.
대장균을 이용하여 재조합 단백질을 만들고 이를 화장품 원료로 적용코자 하는 연구원입니다.
다름이 아니라 현장에서 보통 어떤 방법으로 endotoxin 물질 제거 방법을 알고 싶습니다.
보통 화장품용 단백질 원료들의 COA를 보면 endotoxin level이 1EU/ug이하이던데...
완벽하게 제거를 해야 하는것인지도 궁금하고 저정도 level이면 spec in으로 간주할 수 있는것인지도 궁금합니다
실험실에서야 일반 kit를 구매하여 사용할 수 도 있겠고 또는 Triton x-114와 같은 polymeric detergent를 사용할 수도 있을 거라 생각됩니다.
파일롯이나 실제 생산에 있어서 단백질내에 존재하는 LPS와 같은 endotoxin을 위와 같은 방법으로 제거를 진행하는지 궁금합니다.
down stream 공정이다 보니 단백질의 loss가 없으며 공정 단가가 낮은 방법을 찾고 있습니다.
혹시라도 이분야의 전문가가 있으시면 조언좀 부탁드리겠습니다.
- LPS
- endotoxin
- triton x-114
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 2
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답변
이상후님의 답변
2016-05-09- 4
단백질 의약품의 경우 인체에 투여하는 양이 단백질 종류에 따라 큰 차이가 있기 때문에 LPS같은 내독소 양도 제한되어지고 있습니다. 예로, 인슐린은 10 EU/mg까지 허용되지만, 알파 인터페론의 경우는 100 EU/mg까지 허용되고 있습니다. 그러나 상대적으로 많은 양이 투여되는 혈청알부민이나 monoclonal antibody의 경우는 내독소의 양을 최소한으로 줄여야 하기 때문에, 제거하는데 상당한 어려움이 있습니다. 흔히, 단백질 정제과정중에 상당부분은 제거되지만, 주로 이온결합 크로마크로마토그래피, 소수성 결합 크로마토그래피 및 젤 크로마토그래피 등의 방법을 통해 정제하면 미생물에 의한 특별한 오염이 없다면 LPS 양은 100 unit 이하로 감소하는 것으로 알려져 있습니다. 따라서 단백질이나 오염된 내독소의 특성에 따라 적절한 방법을 사용해야 합니다. 예로, 항체와 같이 등전점이 pH 7 이상인 단백질의 경우는 anion exchange 크로마토그래피를 사용하여 효과적으로 내독소를 제거할 수 있으며, myoglobin과 같은 분자량이 작은 단백질의 경우는 ultrafiltration을 사용하여 다량체 형태의 내독소를 쉽게 제거할 수 있지만 항체 같은 고분자단백질에는 이 방법을 사용할 수 없습니다. 이 외에도 단백질 용액에서 내독소를 제거하기 위한 방법으로 많이 사용되는 것으로는 폴리믹신 B나 히스티딘을 이용한 affinity 크로마토그래피법과 two phase 분획법이 있습니다. two phase 분획법은 세균을 이용하여 제조된 재조합 단백질과 같이 내독소를 제거하는데 특히 효과적이지만 원심분리를 해야 하는 문제로 생물공정에 적용하기에는 쉽지 않다는 단점이 있습니다. 하지만 상대적으로 적은 양이 필요하고 내독소의 허용 기준치가 높은 전임상 실험용 단백질에서 내독소 제거용으로는 적합합니다. 폴리믹신 B나 히스티딘 등을 이용할 경우에는 일부 단백질의 경우 내독소와 함께 지지체에 결합하기 때문에 생산효율이 감소될 수 있는 단점이 있습니다.
(참고문헌: bioWave, 2002, 10) -
답변
김상태님의 답변
2016-05-09- 3
보통 이 endotoxindms 폴리사칼로이드이어서 분자량이나 charge에 대해 제거하는데컬컬럼중에 이를 적용한 방법이 논문 찾아보면 잇고 유기용매로 비극성을 제거하는덴느 부탄올, 에칠아세이트로 제거하느느 법이 있지만 주로 밀리포어에 포어 사이즈로 charge를 통해 흡착하는법이 있습니다
답변감사드립니다.