2016-09-26
org.kosen.entty.User@4f59ace0
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siRNA를 GV oocyte에 microinjection을 하는데요 siRNA를 elution하는 buffer로 1%DEPC를 사용하였는데요~ 보통 TE buffer나 siRNA buffer를 사용한다고 해서요~ oocyte에 0.1%DEPC가 toxic한지 궁금합니다~
- microinjection
- oocyte
- siRNA
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 3
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답변
황규찬님의 답변
2016-09-27- 2
난자 미세주입으로 외래 유전자 혹은 siRNA를 넣을 때 TE buffer, TE buffer에서 E(EDTA)만 제거된 buffer 혹은 전용 siRNA buffer를 사용하는것이 좋을 듯합니다. 왜냐하면, DEPC는 일반적으로 실험실에서 RNase enzyme 억제제로 사용되지만, 몇몇 아미노산 (히스티딘, 라이신, 시스테인, 타이로신) 등에 covalent modification을 유발하여 번역(translation) 등 다른 단백질의 기능을 저하 시킬 수 있습니다. -
답변
이상열님의 답변
2016-09-27- 1
DEPC가 저농도라도 사용하지 않는 것이 좋릏 것입니다. 난자에 다방면에 상당한 영향을 미칠 것이니 가급적 사용하지 마시고 TE를 사용하는데 이도 일반적인 농도보다 10배가량 낮은 농도를 사용하는 것이 좋습니다. -
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장성재님의 답변
2016-09-28- 1
원하시는 실험이 DEPC에 의한 영향을 보는 것이 아니고, 대조군에 DEPC only, 또는 DEPC가 포함된 control siRNA를 사용하신다면 siRNA에 의한 영향을 평가하는데 문제가 없을 수 있습니다.
하기 논문을 참조하세요.
Scientific Reports 4, Article number: 5417 (2014)