2016-12-27
org.kosen.entty.User@328be580
김은경(ejkj76)
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reversephase(역상크로마토그래피) 컬럼을 한번 해보려고 하는데 아는게 없어서 질문드립니다!
혹시 아시는 분께서 실험하는 방법을 자세히 알려주실 수 있으신가요?!
Kromasil 100-16-C18를 사용해서 컬럼을 진행하려고 합니다.
혹시 아시는 분께서 실험하는 방법을 자세히 알려주실 수 있으신가요?!
Kromasil 100-16-C18를 사용해서 컬럼을 진행하려고 합니다.
- reversephase
- 크로마토그래피
- 컬럼
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 3
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답변
이상후님의 답변
2016-12-27- 2
역상 컬럼은 고정상이 비극성(C18, C8 등)이지만 이동상은 극성을 띄는 용매(물, methanol, ethanol, acetonitrile, isopropanol, dioxane, tetrahydrofuran 및 혼합 용매)를 사용합니다. 이러한 용매들의 elution strength는 물 -------> tetrahydrofuran 일수록 더 강합니다. 만약 비극성 표적물질(analytes)을 역상컬럼에서 분리하고자 할때, 이동상을 물과 메탄올의 적정 비율로 사용했다면, 물:메탄올=10:90 -----> 물:메탄올=30:70 으로 점점 비율이 바뀔 경우, analytes의 retention time은 더 길어지게 됩니다. 일반적으로 역상 컬럼을 사용할 경우, analytes에 따라서 조금씩 다르겠지만, 분리조건 수립을 위해서 테스할 경우 이동상 용매로 물과 methanol 또는 물과 acetonitrile을 적절한 비율로 사용하는 것이 일반적입니다. 관련된 자료는 웹상에서 쉽게 검색해 보시면 얻을 수 있습니다.
사용하시고자 하는 컬럼은 pore size가 100 Å이고 충진재내 입자 크기가 16 um이고, 고정상이 C18인 전형적인 역상 컬럼입니다. 기존에 타 연구진들이 사용했던 실험적인 방법을 참고하셔서 초기 분석조건을 수립하는 것이 가장 좋은 방법으로 생각됩니다. -
답변
조윤환님의 답변
2016-12-28- 2
반갑습니다.
일단 컬럼 목적에 따라 방법을 달리해야 합니다.
분석을 목적으로 하는 경우와 오픈컬럼 대용(Prep.)으로 분리를 목적으로 하는 경우 입니다.
두 경우 중 어떤 경우냐에 따라 방법이 크게 달라 집니다.
언급하신 실리카의 스펙으로 봐서는 분리 목적이 아닌가 추측합니다. 분석용 컬럼에 사용하는 실리카에 비해 입경이 매우 크군요. 사실 역상컬럼용 실리카는 매우 비싸기 때문에 실험시 매우 주의해야 합니다. 잠깐의 실수로 큰 대가를 치뤄야할 수도 있기 때문이죠.
보통 Pre-packing된 prep-column을 구입해서 사용하는 것이 보통이죠. 분리조건은 보통 HPLC 분석을 해서 분석 조건을 잡은 후에 그 조건을 기초로 해서 설정하는 것이 보통 입니다.
앞서 답변하신 분이 잘 답변해주셨는데요, 그 방법으로 우선 HPLC 분석을 해서 조건을 잡아보시길 권합니다. 그리고 만약 대상 물질이 amine이나 carboxylic acid처럼 이온화될 수 있는 그룹을 가진 물질이라면 물 대신에 적정 pH의 완충용액을 사용해보시길 권합니다.
참고가 되셨기를
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답변
김동현님의 답변
2017-01-13- 1
만약 실리카 컬럼을 사용한 경험이 있으시다면 무리없이 역상 컬럼도 사용하실 수 있으리라 생각합니다. 실리카와 마찬가지로 우선 앞서 말씀하신 것과 같은 극성이 높은 용매들의 조합으로 역상 TLC를 이용하여 원하시는 물질에 적합한 용매 조합을 선택하시고 그 용매로 역상 컬럼을 패킹한뒤 추출물 또는 혼합물을 로딩하시면 됩니다.
감사합니다~