2017-10-11
org.kosen.entty.User@a8006e0
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E.coli로 재조합 항원을 발현 시켰는데 보관중 degradation이 생기는 경향을 확인하여,이를 방지하기 위하여 protease inhibitor를 사용하려고 합니다.제가 문헌을 참조하였을 때, protein degradation은 크게 protease 또는 chaperon에 의하여 생긴다고 알고있습니다. 그래서 degradation을 방지하기 위하여 protease inhibitor또는 다른 방법이 있는지도 궁금합니다.발현 후 보관상태에 넣을 수 있는 첨가물이 필요합니다! 또한 protease inhibitor를 고를 떄 주의 할 점도 궁금합니다. 또한 문헌을 찾았을 때 이와 관련된 논문이 70년대꺼 밖에 찾지못해서 참고 문헌도 있는지 궁금합니다.
- protein
- E.coli
- protease inhibitor
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답변
백아름님의 답변
2017-10-14- 3
Protease의 종류에 따라 working하는 inhibitor가 다 다릅니다.
가장 많이 이용하는 PMSF 는 Serine protease의 inhibitor이며,
Pestatin A는 Aspartic acid protease inhibitor이고, Leupeptin은 Serine 과 Cysteine protease inhibitor 입니다.
위의 inhibitor들과 EDTA와 같은 metal cheator를 이용하면 대부분의 protease의 활성이 억제되겠지만, 좀더 쉽게 사용하도록 시판되는 protease inhibitor cocktail도 있습니다.
Sigma에서 박테리아용으로 판매하는 제품도 있으며 구글링을 통해 쉽게 찾을 수 있습니다.
그러나 저도 sjsjj님의 말씀과 같이 보관목적과 조건이 중요하다고 생각합니다.
아마도 재조합 항원 단백질을 순수하게 얻기 위하여 정제하는 과정을 진행할 것이라 예상되는데,
그 과정에서 PMSF와 같은 protease inhibitor가 포함되어 있을 것이고,
정제한 단백질의 보관상태에 따라 degradation이 일어날 것 같다고 여겨집니다.
정제한 단백질을 온전한 형태로 잘 보관하기 위해서는 50%의 glycerol 조건에서 deep freezer 안에 보관하는 것이 좋습니다.
그렇지 않을 경우 단백질은 protease가 없더라도 변성되거나 깨질 수 있기 때문입니다. -
답변
장성재님의 답변
2017-10-12- 1
재조합 단백질을 보관하시는 목적이 뭔가요? imunogen인가요?
어떤 조건에서 보관하시죠?
값싸게 E. coli에서 생산한 재조합 단백질의 분해를 억제하기 위해서 비싼 protease inhibitor를 사용할 필요가 있을까요?
좀더 구체적으로 질문을 하시는 편이 좋을 것 같네요.
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답변
임창임님의 답변
2017-10-31- 1
저의 경우에는 Rxx 제품의 타블릿을 사용하고 있습니다.
관련 자료 첨부합니다.