2019-03-05
org.kosen.entty.User@7ef78236
성경주(skj)
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배양된 세포 종류에 따라 세포간 분비되는 물질은 다양합니다. 다양한 줄기세포 실험 관련 결과에서 분비체들의 positive / negative 역할이 보고 되었구요. 분비체 역활에 관심이 생겨 특정세포를 배양 (serum free)한 후 hippocampal neuron cell에 ischemia 상태를 유도 후 secretome이 포함된 culture media로 배양했을때 항염 효과를 발견하였습니다. 여기서 궁금한점은,
1. control group: serum free media 조건에서 진행하는데 굳이 serum+ 조건도 필요할까요?
2. 액체상태의 secretome에 포함된 단백질(항염, 성장인자 etc..,)을 동물모델(i.c.v. injection)에 적용하고 싶지만 해밀턴 실린지(5ul)의 전달 한계때문에 medium(+secretome) 인자 단백질을 농축하는 방법이 있는지......
ps: secretome에 포함된 여러가지 인자들은 array등을 통해서 분석해야 하지만 상황이 여의치 않아 ref.,를 참고했네요.
1. control group: serum free media 조건에서 진행하는데 굳이 serum+ 조건도 필요할까요?
2. 액체상태의 secretome에 포함된 단백질(항염, 성장인자 etc..,)을 동물모델(i.c.v. injection)에 적용하고 싶지만 해밀턴 실린지(5ul)의 전달 한계때문에 medium(+secretome) 인자 단백질을 농축하는 방법이 있는지......
ps: secretome에 포함된 여러가지 인자들은 array등을 통해서 분석해야 하지만 상황이 여의치 않아 ref.,를 참고했네요.
- 분비체
- 항염증
- 성장인자
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 4
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답변
한민준님의 답변
2019-03-06- 3
저라면 먼저 secretome이 포함된 culture media를 LC-MS/MS로 분석을 해 볼거 같습니다. fishing을 하려면 최소한 바닷가에는 나가야 하는데요.. 이런 실험이 실제적으로 false positive인 경우가 많이 있거든요. 실제로 anti-inflammation에 관련이 있는 cytokine등이 세포 배양에서 secretion이 되는지 확인하지 않고서는 대부분 논문에서 리뷰어들이 쉽게 넘어가지 않을것입니다.
control 실험으로는 serum free media를 사용하시면 될거 같습니다.
단백질 농축은 여러가지 방법이 있습니다. 그런데 대략적인 단백질의 크기를 알면 더 많은 도움이 됩니다.
http://www.emdmillipore.com/US/en/life-science-research/protein-sample-preparation/protein-concentration/amicon-ultra-centrifugal-filters/YKSb.qB.GXgAAAFBTrllvyxi,nav
salt-in salt-out precipitation을 시키기도 하지만 이 경우 활성에 문제가 생길수도 있습니다. -
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김형택님의 답변
2019-03-06- 3
1. control group: serum free media 조건에서 진행하는데 굳이 serum+ 조건도 필요할까요?
-> 필요없습니다. 그리고 secretome은 Serum+를 사용하게 되면 Serum의 성분때문에 분석이 어렵기 때문에 serum free 조건에서 실험을 진행합니다.
2. 액체상태의 secretome에 포함된 단백질(항염, 성장인자 etc..,)을 동물모델(i.c.v. injection)에 적용하고 싶지만 해밀턴 실린지(5ul)의 전달 한계때문에 medium(+secretome) 인자 단백질을 농축하는 방법이 있는지......
-> Ultra Centrifuse를 사용해서 돌리면 밑에 하얀 분비물 같은게 뭉쳐있는게 보입니다.
그걸 하시는걸 권장드립니다. 필터를 이용한 농축 방법도 사용해봤는데요. 생각보다 농축이 안되고 시간도 오래걸리더라구요. -
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변경필님의 답변
2019-03-06- 2
아래와 같이 답변 드립니다.
1. control group: serum free media 조건에서 진행하는데 굳이 serum+ 조건도 필요할까요?
serum 자체가 성장인자 등과 같은 많은 단백질, 폴리펩타이드, 호르몬등 이 포함 되어 있기 때문에 줄기세포에서 분비되는 물질과 구분하기 위해서 serum+ 조건을 사용하지 않습니다.
참고로, 대부분이 동물유래 serum을 배양시 사용하기 때문에 동물유래 위험물질(예, TSE(BSE), mycoplasma, virus) 등이 포함 될 수 있기 때문에 세포 및 배양액 등을 인체에 사용할때 serum은 제거 대상이 됩니다.
2. 액체상태의 secretome에 포함된 단백질(항염, 성장인자 etc..,)을 동물모델(i.c.v. injection)에 적용하고 싶지만 해밀턴 실린지(5ul)의 전달 한계때문에 medium(+secretome) 인자 단백질을 농축하는 방법이 있는지......
일반적으로 연구 목적으로는 초고속원심분리(Ultra)을 사용한 막 분리 사용하여 원하는 크기의 물질을 농축합니다.
상세한 내용은 exosome, extracellular vesicles, 세포외소포로 검색해 보시면 좀 더 많은 정보를 찾아 보실 수 있을 것입니다. -
답변
심우영님의 답변
2019-04-30- 1
1. control group: serum free media 조건에서 진행하는데 굳이 serum+ 조건도 필요할까요?
--> secretome free FBS 혹은 media를 쓴다면 무방합니다.
2. 액체상태의 secretome에 포함된 단백질(항염, 성장인자 etc..,)을 동물모델(i.c.v. injection)에 적용하고 싶지만 해밀턴 실린지(5ul)의 전달 한계때문에 medium(+secretome) 인자 단백질을 농축하는 방법이 있는지......
--> Sartorius의 Vivaspin이라는 kit이 그나마 쓸만 합니다.
좋은 답변 감사드립니다. 참고하겠습니다.