2019-12-11
org.kosen.entty.User@2f60ea79
김옥화(kah3173)
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안녕하세요.
저는 주로 암세포를 가지고 실험을 하고 있는 학생입니다.
요즘에 새로 시도하는 연구가 있는데 제가 이쪽으로 공부를 많이 못해서 궁금한 점이 많아서
코젠 여러분께 질문 드려요.
제가 원하는 단백질에 특정 서열이 inhibitor로 작용하는지 알아보려고 peptide를 합성했는데
CPP -peptide라는 것을 아예 생각을 못하고 free peptide 서열로 합성을 했습니다.
혹시 free peptide를 세포에 발현시켜보신 분이 있다면 방법이나 아니면 참고문헌을 공유해주시면 감사하겠습니다.
참고문헌은 링크만 연결해주시면 제가 찾아보도록 하겠습니다.
저는 주로 암세포를 가지고 실험을 하고 있는 학생입니다.
요즘에 새로 시도하는 연구가 있는데 제가 이쪽으로 공부를 많이 못해서 궁금한 점이 많아서
코젠 여러분께 질문 드려요.
제가 원하는 단백질에 특정 서열이 inhibitor로 작용하는지 알아보려고 peptide를 합성했는데
CPP -peptide라는 것을 아예 생각을 못하고 free peptide 서열로 합성을 했습니다.
혹시 free peptide를 세포에 발현시켜보신 분이 있다면 방법이나 아니면 참고문헌을 공유해주시면 감사하겠습니다.
참고문헌은 링크만 연결해주시면 제가 찾아보도록 하겠습니다.
- free peptide
- transfection
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 3
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답변
이호진님의 답변
2019-12-12- 3
저는 free peptide만을 세포에서 발현시킨 연구는 본 적이 없어요. 그 이유는 펩타이드는 주로 합성해서 세포에 주입합니다. 펩타이드 합성 기술이 많이 발달해서, 순도도 높은 펩타이드를 쉽게 만들 수 있습니다. 물론 펩타이드를 주문하셔야 하지만 말입니다. 펩타이드 서열이 20-30개 정도는 합성 가능하고요. 그 이상은 순도 문제가 있지만.. 할 수 있는 걸로 알고 있어요.
세포 연구를 할 때는 세포막 투과할 수 있도록 Tag를 붙이면 되는데요. 이것도 유기 합성할 때 요구하면 됩니다.
물론 펩타이드 합성이 어려운 경우에 (유기화학적으로) 세포에서 발현해서 분리하는 경우도 있지만요. 이것도 서열이 40-50개 정도 되는 것이어야 나중에 정제할 수 있습니다.
펩타이드 서열이 얼마나 되는지 모르지만.. 경우에 따라서 연구 방법이 달라질 수는 있습니다. -
답변
최재원님의 답변
2019-12-12- 3
8개의 아미노산 정도 크기의 펩타이드라면, 그냥 culture medium에 농도별로 처리하셔서 실험을 진행하셔도 무방할 것 같습니다. CPP peptide라면 RGD motif와 같은 cell penetrating peptide를 말씀하시는 것 같은데, 12개~20개 미만의 peptide들은 비교적 세포 내로 잘 들어가는 편입니다. 즉, 8개 펩타이드에 RGD sequence를 추가하여 합성더라도 엄청나게 큰 효과를 기대하기가 어려울 수도 있고, 관심있으신 Target protein에 binding 하는데 있어 RGD sequence가 어떤 영향을 미칠지 알 수 없기도 하구요.
합성을 진행하신 펩타이드를 이용해서 바로 실험을 진행하셔도 관계 없을 것 같습니다.
아래 논문도 참고적으로 활용하시면 도움 되실 것 같습니다.
Molecules (2018), Vol. 23, 295
Title: Cell Penetrating Peptides as Molecular Carriers for Anti-Cancer Agents
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답변
김영일님의 답변
2019-12-12- 2
www.us.yahoo.com에서 "the method to develop of free peptides in cells cell"을 찾아
<A practical approach for Intracellular protein delivery> 논문을 참고해 보시면 도움이
되지 않을까 합니다.
이미 펩타이드를 합성을 해버렸는데 아미노산 8개 정도 되는 크기거든요. 이미 합성한 걸 가지고 있어서 아깝기도 하고 해서...