2020-04-10
org.kosen.entty.User@430ca470
이은선(les2505)
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pET protein expression system의 기본 특성과 2종 이상의 pET vector들을 recombinant protein의 순수분리 관점에서 비교해주세요.
- vector
- 재조합단백질
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 2
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답변
최재원님의 답변
2020-04-13- 3
pET 계열의 vector들은 종류가 굉장히 많이 있습니다. 아래의 웹사이트에서 기본적으로 널리 이용되는 pET vector의 종류 및 분리/정제하고자 하는 단백질에 따라 선택할 수 있는 vector를 선별해두었습니다.
https://www.merckmillipore.com/KR/ko/life-science-research/genomic-analysis/dna-preparation-cloning/pet-expression-vectors/qFSb.qB.mLQAAAFA6.VkiQ0G,nav
기본적인 항생제 선택 등은 별도로 첨부해드린 pdf 파일이 도움 되실 것 같습니다.
순수 분리/정제의 관점에서 보면 질문하신 'pET vector' 뿐만 아니라 Competent cell이나 사용할 resin에 따라서도 차이가 날 수 있다는 점을 우선 말씀드립니다.
pET vector만 보았을 때에는, 무엇보다도 분리/정제하고자 하는 단백질의 CDS (coding DNA sequence)가 적절한 제한효소를 이용하여 cloning 되었다고 가정했을 때,
1) 정제하고자 하는 단백질은 어떤 tag을 이용할 것인지 (His, Nus, GST 등등)
2) Signal sequence의 존재 유무
3) Protease에 의한 cleavage site의 존재 유무
4) Tag의 위치 (N-term, C-term, Both term 등)
등을 고려하셔야 할 것 같습니다. 자세한 내용은 첨부해드린 pdf 파일을 이용하셔서 8 page의 table을 보시면 도움 되실 것 같습니다. -
답변
한민준님의 답변
2020-04-11- 2
https://www.emdmillipore.com/US/en/life-science-research/genomic-analysis/dna-preparation-cloning/pet-expression-vectors/qFSb.qB.mLQAAAFA6.VkiQ0G,nav
여기 참조하시면 많은 정보 얻을수 있습니다.
pET System은 pGEX vector와 함께 E Coli에서 재조합 단백질을 발현 시키고 정제하는데 사용하는 양대 산맥이죠..ㅋㅋ
pET vector를 이용하면 원하는 target gene을 cloning 해서 집어 넣고 E Coli에서 원하는 단백질을 발현 시킬 수 있습니다. pET vector에는 bacteriophage T7 promoter가 달려있어서 원하는 gene을 E Coli에서 translation시켜 단백질을 뽑아낼수 있습니다. 또한 Lac operon에 의해서 regulation 되어지기 때문에 IPTG를 넣어 induction으로 발현을 조절합니다 (BL21 competent cell사용)
여러 다양한 종류의pET vector가 현재 개발되어있는데 보통 His-tag/GST-tag이 달려있어서 frame에 맞추어 원하는 gene을 넣어주면 fusion된 단백질이 생성되어서 정제가 가능합니다.