2021-04-01
org.kosen.entty.User@458d27e3
박지훈(lemon9551)
- 1
안녕하십니까
단백질 구조연구실 학생입니다.
단백질 발현 유도하려고 사수분 조언 따라 여러가지 competent cell(이하 컴셀이라 할게요)에 몇가지 vector를 써보고 있는데,
BL21 Rosetta2나 BL21 codon plus 컴셀에 pBAD vector를 안쓴다고 하면서 그 이유가 왜일지 알아보라는데
이전에 pbad vector를 한 번 써봤는데 그 때는 BL21 C43에서 발현시켰습니다.
나름 찾아봐도 pBAD는 arabinose induction이고 pET는 IPTG induction인 차이 외에는 차이를 모르겠어서 ㅠㅠ 질문해봅니다
선배님들 도와주세요
단백질 구조연구실 학생입니다.
단백질 발현 유도하려고 사수분 조언 따라 여러가지 competent cell(이하 컴셀이라 할게요)에 몇가지 vector를 써보고 있는데,
BL21 Rosetta2나 BL21 codon plus 컴셀에 pBAD vector를 안쓴다고 하면서 그 이유가 왜일지 알아보라는데
이전에 pbad vector를 한 번 써봤는데 그 때는 BL21 C43에서 발현시켰습니다.
나름 찾아봐도 pBAD는 arabinose induction이고 pET는 IPTG induction인 차이 외에는 차이를 모르겠어서 ㅠㅠ 질문해봅니다
선배님들 도와주세요
- vector
- induction
- competent cell
지식의 출발은 질문, 모든 지식의 완성은 답변!
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
답변 1
-
답변
한민준님의 답변
2021-04-01- 3
먼저 각 vector들이 왜 다른 것에 의해 induction이 되는지를 이해하셔야 합니다.
pET vector의 경우는 우리가 잘 알고 있는 lac operon T7 promoter를 사용해서 protein expression을 조절하고 있으면 pBAD의 경우는 arabinose operon을 사용하는 것입니다.
따라서 원칙상으로는 pBAD의 경우는 araBAD가 작동하지 않는 균주를 사용해야 합니다. BL21 계열의 많은 컴셀들은 araBAD가 작동하기 때문에 TOP10과 같은 균주를 recommend 합니다. 하지만 protein work이라는 것이 워낙에 케바케라서 실제로 pBAD에 BL21을 사용해도 발현이 잘 되는 gene들은 문제없이 발현이 됩니다.
BL21 균주는 T7 RNA polymerase를 갖고 있기 때문에 굳이 pBAD를 쓰지 않는 이유도 있겠지만 mjbio 님 말처럼 araBAD가 없는 균주를 써야 arabinose 대사가 안 일어나니까요. Inducer인 arabinose가 degradation되면, 정확한 induction condition 조절이 어렵습니다. 하지만 어차피 되는 애들은 어떻게 해도 잘 됩니다.ㅋㅋㅋ