2007-10-02
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최훈성(hschoi77)
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4% PFA로 조직이나 cell을 고정하는 원리좀 가르쳐주세요
- 4% PFA
- fix
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 2
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답변
김윤상님의 답변
2007-10-03- 0
어떤 수준의 답변을 요구하시는지 잘 모르겠습니다만... 일반적으로, 세포내의 단백질들간에 혹은 단백질과 펩티드 간에 교차결합(crosslinking)을 일으켜서, 세포의 형태를 유지하는 동시에, 여러 세포내 효소의 활성을 억제하는 것으로 알고 있습니다만... -
답변
장성재님의 답변
2007-10-03- 0
PFA (paraformaldehyde)의 정식 화학명은 polymethanal입니다. (poly - polymer, meth - single carbon, -al - aldehyde group) 주로 조직이나 세포의 고정에 사용됩니다. 사용 목적에 맞추어 2-4% 정도로 특정 버퍼나 증류수에 희석하여 사용합니다. 조직이나 세포를 희석한 PFA 용액에 담근 후 대개 실온이나 37도에서 20-30분 정도를 incubation 한 후 버퍼나 증류수로 washing을 2-3회 반복합니다. PFA의 알데히드기는 반응성이 강하여 쉽게 아미노 그룹을 아미드로 또는 알콜 그룹을 에스테르로 바꾸는 반응을 유도합니다. 이렇게 세포나 조직을 형태의 변형이 없이 고정시키는 작용을 하게 됩니다. 이러한 반응은 비가역적 반응이며, 잔여 PFA 등은 다음의 실험 (항체를 이용한 탐침 등)을 위해서 제거해 주어야 합니다. 잔여 PFA가 항체 등과 반응하여 항체에 영향을 미치는 수도 있습니다. PFA 이외에 탈수 작용과 병행하여 세포를 고정시키는 fixatives로 ethanol 이나 methanol을 사용하기도 합니다.