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지식나눔

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TFA 제거 방법이 궁금합니다.

2008-10-31 org.kosen.entty.User@5bd3c0be 문창훈(windkail)
  • 1
안녕하세요. 제가 정제를 하는데 TFA buffer를 사용합니다. 정제 후 sample에 TFA가 섞여있는데 TFA만 깔끔히 제거 하는 방법이 궁금합니다. 동결건조로 날리면 될것이라 생각했는데 하루정도 건조시켜도 남아있는것 같습니다. 확실히 제거 할수 있는 방법이 있다면 알려주세요. 그럼 즐거운 하루 보내세요.
  • TFA
  • 제거
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답변 1
  • 답변

    이배훈님의 답변

    2008-11-02
    • 2

    첨부파일

    >안녕하세요. >제가 정제를 하는데 TFA buffer를 사용합니다. >정제 후 sample에 TFA가 섞여있는데 TFA만 깔끔히 제거 하는 방법이 궁금합니다. >동결건조로 날리면 될것이라 생각했는데 하루정도 건조시켜도 남아있는것 같습니다. >확실히 제거 할수 있는 방법이 있다면 알려주세요. >그럼 즐거운 하루 보내세요. TFA( 강한 산성)는 아미노산 정제시 아민그룹들에(예를 둘어, Lysine) protonation 일어나게 되므로 떼어 놓기가 쉽지 않을 것으로 예상됨. 여러사람들이 얘기를 종합하면 음이온 교환수지를 사용해서 또한 acetic acid, acetate, HCL 등을 사용하여 잔류 fta를 제거 하는 방법을 사용하는 것 같군요 아래 website에서 여러사람들이 tfa 제거법에 대해 토의했습니다. http://www.abrf.org/archives/hmail/0014/0076.html In our laboratory we change the TFA salt in peptide to acetate salt by dissolving of peptide TFA salt with Acetic acid:TDW (1:1) and liophelaze this mixture. Leah Efron I have a problem with the below sugestion from Leah Efron. If you check out paper by Werner WE, Demorest DM, Wiktorowicz JE: Analysis of residual TFA in synthetic peptides. Biotechniques 1995;78 (pgs ?) you will see that acetic acid will not replace TFA but that HCl will. Even base solutions will not remove the TFA. I redissolve my peptides in 50-100 mM HCl, freeze and the dry in a speed vac. This replaces TFA salt with a Cl salt. Tom Haas On an equimolar basis I'm sure you're right. But I wonder if things are a bit different if one has first dried the peptide to remove excess TFA, then redisolved/resuspended in acetic acid? This principle (mass action) is the basis of the "TFA fix" introduced by Alex Apffel and his colleagues for dealing with the suppresion caused by TFA when introducing an LC eluate into an electrospray mass spec. The eluant (with the usual 0.05-0.10% TFA) is mixed with half its volume of a mixture consisting of 1:1 acetic acid:acetonitrile. It is impressively good in displacing TFA and improving the signal in the mass spec. See: Apffel A, Fischer S, Goldberg G, et al: Enhanced sensitivity for peptide mapping with electrospray liquid chromatography-mass spectrometry in the presence of signal suppression due to trifluoroacetic acid-containing mobile phases. J.Chromatogr.A. 1995; 712:177-190. Rod Levine -----------------------------------------------------------------------
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    >안녕하세요. >제가 정제를 하는데 TFA buffer를 사용합니다. >정제 후 sample에 TFA가 섞여있는데 TFA만 깔끔히 제거 하는 방법이 궁금합니다. >동결건조로 날리면 될것이라 생각했는데 하루정도 건조시켜도 남아있는것 같습니다. >확실히 제거 할수 있는 방법이 있다면 알려주세요. >그럼 즐거운 하루 보내세요. TFA( 강한 산성)는 아미노산 정제시 아민그룹들에(예를 둘어, Lysine) protonation 일어나게 되므로 떼어 놓기가 쉽지 않을 것으로 예상됨. 여러사람들이 얘기를 종합하면 음이온 교환수지를 사용해서 또한 acetic acid, acetate, HCL 등을 사용하여 잔류 fta를 제거 하는 방법을 사용하는 것 같군요 아래 website에서 여러사람들이 tfa 제거법에 대해 토의했습니다. http://www.abrf.org/archives/hmail/0014/0076.html In our laboratory we change the TFA salt in peptide to acetate salt by dissolving of peptide TFA salt with Acetic acid:TDW (1:1) and liophelaze this mixture. Leah Efron I have a problem with the below sugestion from Leah Efron. If you check out paper by Werner WE, Demorest DM, Wiktorowicz JE: Analysis of residual TFA in synthetic peptides. Biotechniques 1995;78 (pgs ?) you will see that acetic acid will not replace TFA but that HCl will. Even base solutions will not remove the TFA. I redissolve my peptides in 50-100 mM HCl, freeze and the dry in a speed vac. This replaces TFA salt with a Cl salt. Tom Haas On an equimolar basis I'm sure you're right. But I wonder if things are a bit different if one has first dried the peptide to remove excess TFA, then redisolved/resuspended in acetic acid? This principle (mass action) is the basis of the "TFA fix" introduced by Alex Apffel and his colleagues for dealing with the suppresion caused by TFA when introducing an LC eluate into an electrospray mass spec. The eluant (with the usual 0.05-0.10% TFA) is mixed with half its volume of a mixture consisting of 1:1 acetic acid:acetonitrile. It is impressively good in displacing TFA and improving the signal in the mass spec. See: Apffel A, Fischer S, Goldberg G, et al: Enhanced sensitivity for peptide mapping with electrospray liquid chromatography-mass spectrometry in the presence of signal suppression due to trifluoroacetic acid-containing mobile phases. J.Chromatogr.A. 1995; 712:177-190. Rod Levine -----------------------------------------------------------------------
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