2010-01-16
org.kosen.entty.User@725eb19a
유현정(totoros)
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Real-time PCR 전용 primer의 특징 및 제작시 주의할 사항을 무엇이 있을까요?
일반 RT-PCR 용으로도 사용이 가능한가요?
- RT-PCR
- gene expression
- mRNA
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답변 6
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답변
김홍기님의 답변
2010-01-16- 2
>Real-time PCR 전용 primer의 특징 및 제작시 주의할 사항을 무엇이 있을까요? >일반 RT-PCR 용으로도 사용이 가능한가요? 크게 두가지가 있습니다. 1. 형광이 붙은 Taqman probe를 사용하는 real-time PCR이 있고 설명이 길으니, 자세한 건 구글 찾아보세요... 가격비싸나 정확한 실험 결과 기대할 수 있습니다. 2. 일반 PCR과 같은 primer를 사용하는 SYBR Green 1 형광다이가 있습니다. 이 경우 Template과 primer가 priming 하여 extention 하는 과정에서 상보결합에 SYBR Green 1이 incorporation 되면서 SYBR Green 1이 inactive -> active 로 변하면서 이를 기기가 읽어 들이는 방식입니다. 일반 primer로 가능하나, 몇가지 주의사항이 있습니다. product 사이즈등 자세한 건 구글 검색하시면 친철하게 나옵니다. -
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DELETED님의 답변
2010-01-16- 2
>Real-time PCR 전용 primer의 특징 및 제작시 주의할 사항을 무엇이 있을까요? >일반 RT-PCR 용으로도 사용이 가능한가요? >특별한 점은 없습니다. 보통 PCR primer 제작하듯이 하시면됩니다. 궂이 따지자면, SYBR green dye를 이용할 경우, primer를 product size가 200~300 bp 정도되게 제작하시면 됩니다. 그 이상은 잘 사용하지 않습니다. 또한 RT-PCR 용으로도 당연히 사용가능합니다. -
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박수제님의 답변
2010-01-16- 2
>Real-time PCR 전용 primer의 특징 및 제작시 주의할 사항을 무엇이 있을까요? >일반 RT-PCR 용으로도 사용이 가능한가요? 우선 amplicon의 size가 200bp 안쪽으로 하시는 것이 좋습니다. 보통 SYBR 방식을 많이 사용하시기 때문에 상당히 specificity가 높아야 하고요. 일반 RT-PCR도 상관없습니다만.. 그 사이즈가 크다면 좀 그렇겠죠? Ct값과의 상관관계도 생각해야 하기 때문에 200bp 정도를 추천합니다. 그리고 Taqman 방식은 amplicon 사이에 probe가 들어가야 하는데.. 이때 이 probe 제작이 상당히 어렵습니다. 2차 구조 등도 생각해야 하죠... 몇 몇 회사에서는 이 probe를 설계 및 제작해주는 것으로 알고 있습니다. -
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이상후님의 답변
2010-01-17- 2
>Real-time PCR 전용 primer의 특징 및 제작시 주의할 사항을 무엇이 있을까요? >일반 RT-PCR 용으로도 사용이 가능한가요? PCR product의 size가 얼마나 되는지 먼저 확인 해보시고 사용하시는것이 좋을듯 합니다. Real 용을 RT-PCR에 사용하는것에 특별한 문제는 없지만.. Real 용 primer 는 PCR product 의 사이즈가 50-100bp 정도되게 사용을 하거든요. 그러다 보니 그냥 전기영동으로 확인 하는것이 쉽지가 않습니다. 그리고 사이즈가 너무 작아서 정확하게 target 밴드인지 확인할 수 있는 방법도 없구요. primer 자체로는 사용에 문제가 없지만 product의 크기에 문제가 좀 있을수 잇습니다 참고하시기 바랍니다. PCR product의 size가 확인이 먼저 필요하구요. real-time PCR 용을 RT-PCR에 사용하는것에 특별한 문제는 없습니다. real-time PCR 용 primer는 PCR product의 사이즈가 50-100bp 정도 사용합니다. 이런 사이즈는 EP에서 쉽게 볼 수 없는 크기이죠. 또한 size가 너무 작아서 정확하게 target 밴드인지 확인할 수도 없을 거 같구요. primer 자체로는 사용에 문제가 없지만 product의 크기에 문제가 약간 생길 수 있겠네요.. -
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신동욱님의 답변
2010-01-31- 2
>Real-time PCR 전용 primer의 특징 및 제작시 주의할 사항을 무엇이 있을까요? >일반 RT-PCR 용으로도 사용이 가능한가요? http://www.appliedbiosystems.co.kr/을 참조하세요 inventoried를 보통 구매를 하는 데, 이는 검증이 된 primer이기 때문입니다. 특별한 것 아니라면, 안전하게 inventoried primer로 해당 타깃의 발현 변화를 하세요 -
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안길홍님의 답변
2010-01-16- 0
>Real-time PCR 전용 primer의 특징 및 제작시 주의할 사항을 무엇이 있을까요? >일반 RT-PCR 용으로도 사용이 가능한가요? 첨부 참고자료