KOSEN 한인과학기술자네트워크

닫기

더 많은 혜택을 위해
로그인 하세요.

지식나눔

지식나눔

PCR 에서 질문이요

2010-01-29 org.kosen.entty.User@1d79ed65 조영일(youngil84)
  • 1
pcr 합성할때요, 첫 시작부분을 primer가 붙어서 그 부분부터 extension이 시작되잖아요..그럼 종결부분엔 어떻게 처리를 하죠?
  • 1
지식의 출발은 질문, 모든 지식의 완성은 답변! 
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
답변하기
답변 1
  • 답변

    이상후님의 답변

    2010-01-30
    • 0
    >pcr 합성할때요, 첫 시작부분을 primer가 붙어서 그 부분부터 extension이 시작되잖아요..그럼 종결부분엔 어떻게 처리를 하죠? PCR의 원리부터 아셔야 될 거 같습니다. PCR의 원리는 이중가닥(double strand)인 DNA를 template로 하여 전체 DNA로부터 원하는 DNA 를 선택적으로 증폭시킵니다. PCR 과정은 denaturation(변성), annealing(접합) , extension(확장) 의 3단계로 구분되며 주형이 되는 DNA 에 94℃로 고온을 가하게 되면 double strand 로 되어있는 주형 DNA가 single strand DNA 로 denaturation(변성)이 됩니다. 증폭을 원하는 DNA size 에 맞게 제작된 상보적인 작은 single strand DNA(primer, 15~30mer) 가 변성된 주형 DNA에서 위치를 찾게 되고 45℃~65℃ 정도의 적당한 온도(TM, 이것을 계산하는 공식이 있습니다.) 로 annealing 시킵니다. 그런 다음 72℃로 온도를 올려주면 Taq-polymerase 가 붙어서 extension(확장)하게 됩니다. 이런 과정을 25~35cycle 정도 반복하게 되면 cycle 수만큼 2의 제곱승으로 DNA 단편이 증폭되게 됩니다. PCR 에 사용되는 시약은 1. 10x Taq buffer 2. dNTP 3. Template DNA 4. Primer (forward & reverse) 5. Taq-polymerase 이며 그 밖에도 제품에 따라서 MgCl2가 넣어 있는것과 따로 되어있는것이 있습니다. 이렇게 넣은 Total volume을 20ul 이나 50ul 로 맞추고 (이때 나머지 volume은 autoclave 한 멸균수를 사용합니다.) PCR machine 을 사용하여 조건을 맞춰주면 됩니다. PCR 의 종류에는 long PCR, Nested PCR, Hot start PCR, Rapid amplification of cDNA ends(RACE), In situ PCR등이 있고 이런 것들은 template나 sample 의 종류나 상태에 따라 사용되어 집니다. 참고로 좀 더세부적인 설명은 URL을 확인해 보세요.
    답변수정
    >pcr 합성할때요, 첫 시작부분을 primer가 붙어서 그 부분부터 extension이 시작되잖아요..그럼 종결부분엔 어떻게 처리를 하죠? PCR의 원리부터 아셔야 될 거 같습니다. PCR의 원리는 이중가닥(double strand)인 DNA를 template로 하여 전체 DNA로부터 원하는 DNA 를 선택적으로 증폭시킵니다. PCR 과정은 denaturation(변성), annealing(접합) , extension(확장) 의 3단계로 구분되며 주형이 되는 DNA 에 94℃로 고온을 가하게 되면 double strand 로 되어있는 주형 DNA가 single strand DNA 로 denaturation(변성)이 됩니다. 증폭을 원하는 DNA size 에 맞게 제작된 상보적인 작은 single strand DNA(primer, 15~30mer) 가 변성된 주형 DNA에서 위치를 찾게 되고 45℃~65℃ 정도의 적당한 온도(TM, 이것을 계산하는 공식이 있습니다.) 로 annealing 시킵니다. 그런 다음 72℃로 온도를 올려주면 Taq-polymerase 가 붙어서 extension(확장)하게 됩니다. 이런 과정을 25~35cycle 정도 반복하게 되면 cycle 수만큼 2의 제곱승으로 DNA 단편이 증폭되게 됩니다. PCR 에 사용되는 시약은 1. 10x Taq buffer 2. dNTP 3. Template DNA 4. Primer (forward & reverse) 5. Taq-polymerase 이며 그 밖에도 제품에 따라서 MgCl2가 넣어 있는것과 따로 되어있는것이 있습니다. 이렇게 넣은 Total volume을 20ul 이나 50ul 로 맞추고 (이때 나머지 volume은 autoclave 한 멸균수를 사용합니다.) PCR machine 을 사용하여 조건을 맞춰주면 됩니다. PCR 의 종류에는 long PCR, Nested PCR, Hot start PCR, Rapid amplification of cDNA ends(RACE), In situ PCR등이 있고 이런 것들은 template나 sample 의 종류나 상태에 따라 사용되어 집니다. 참고로 좀 더세부적인 설명은 URL을 확인해 보세요.
    등록된 댓글이 없습니다.
목록
목록