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논문을 보다보니 궁금한것이 있어 이렇게 질문을 드립니다.
샤페론과 목적단백질을 공발현시키는 논문에서 material&method에서는 Lowry법을 이용하여 단백질 농도를 구한다고 하였는데...
Result에서 목적 단백질의 농도(percentage)를 SDS-PAGE한 gel을 image analyzer를 이용하여 구한 값을 보여주는데...
gel을 image analyzer로 구한 결과값이 목적 단백질만의 량을 정량(percentage)할 수 있나요??
일반적으로 이용하는 bradford assay나 lowry assay를 이용하면 샤페론등 모든 단백질 농도를 구해서 목적 단백질을 정량 할 수 없나요??
- SDS
- Protein
- gel
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변
장성재님의 답변
2011-07-06- 2
세포에서 샤페론을 공발현시켜 표적 (목적) 단백질만의 농도를 정량하기 위해서는 표적단백질만을 분리/정제한 후 님께서 언급하신 일반적으로 사용하는 bradford나 lowry assay로 발색/정량하여야 하겠지요.
따라서, 간단하게 total cell lysate (또는 분비단백질일 경우 배양액)를 SDS-PAGE로 분리시킨 후 coomasiae blue로 염색한 후 표적단백질의 밴드 (density)를 BSA 등의 표준물질과 비교하여 image analysis하면 단백질의 농도를 정량화 할 수 있습니다. 이 또한, 원리는 단백질을 coomasiae blue로 염색한 후 농도를 결정하는 것이므로 lowry법과 동일합니다.
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논문을 보다보니 궁금한것이 있어 이렇게 질문을 드립니다.
샤페론과 목적단백질을 공발현시키는 논문에서 material&method에서는 Lowry법을 이용하여 단백질 농도를 구한다고 하였는데...
Result에서 목적 단백질의 농도(percentage)를 SDS-PAGE한 gel을 image analyzer를 이용하여 구한 값을 보여주는데...
gel을 image analyzer로 구한 결과값이 목적 단백질만의 량을 정량(percentage)할 수 있나요??
일반적으로 이용하는 bradford assay나 lowry assay를 이용하면 샤페론등 모든 단백질 농도를 구해서 목적 단백질을 정량 할 수 없나요??