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HPLC 분석법을 논문에서 찾아보고있는데
10mM Potassium phosphate buffer (pH6.9)
pH는 phosphoric acid 로 맞추면 된다지만,
Potassium phosphate 는 종류가 세가지나 되는데
mono, di, Tri중 아무 종류나 사용해도 무방한건가요??
마찬가지로 10mM sodiium phosphate 도 아무 종류나 사용해도 되는건가요??
답변 부탁드립니다^^
- HPLC
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답변
이상후님의 답변
2012-02-09- 2
먼저 답변하신 분의 설명이 조금 잘못 된거 같군요..
버퍼는 짝산-짝염기의 개념이므로 mono나 di-또는 tri 중 하나만 가지고는 정확한 버퍼를 만들수는 없습니다.
Phosphate buffer는 monobasic과 dibasic 모두 제조해서 적정 비율대로 혼합해야 됩니다.
보통 buffer 제조법에 보면, 만들고자 하는 버퍼의 농도(여기서는 10 mM)를 고려하여,
KH2PO4와 K2HPO4를 10 mM로 먼제 제조한 후에, 제조법에 나와 있는 mono와 di-의 혼합 비율대로 섞어 주게 되면 됩니다. 보통 버퍼에 관련된 서적에 보면 pH에 따른 1M 또는 0.1M phosphate buffer를 기준으로 혼합해야 될 mono와 di-의 volumn이 나와 있을 것입니다.
만약 10 mM 농도를 제조하고자 할 경우에는 책에 나와 있는 몰농도와 볼륨을 희석하여 계산하시면 됩니다. 참고로 아래 표는 pH에 따른 0.1M phosphate buffer 제조법입니다. 여기서 몰농도를 10배 희석하여 계산(부피도 몰농도가 10배 희석되게 되면 변하게 되므로)하시어, pH 6.9에 맞는 mono와 di-의 부피대로 섞어 주게 되면 원하는 버퍼를 제조할 수 있습니다.
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HPLC 분석법을 논문에서 찾아보고있는데
10mM Potassium phosphate buffer (pH6.9)
pH는 phosphoric acid 로 맞추면 된다지만,
Potassium phosphate 는 종류가 세가지나 되는데
mono, di, Tri중 아무 종류나 사용해도 무방한건가요??
마찬가지로 10mM sodiium phosphate 도 아무 종류나 사용해도 되는건가요??
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답변
강광철님의 답변
2012-02-09- 0
첨부파일
10mM Potassium phosphate buffer
10mM K2HPO4 와 5mM KH2PO4의 stock sol을 제조한후 pH가 6.9가 될때 까지 1가 용액에 2가 용액을 잘혼합하여 PH를 조절하면 되네요..잘못 설명을 드려서 죄송.
SØRENSEN’S PHOSPHATE BUFFER; PH 5.8?8.0, PKA = 7.20
Mix appropriate volumes of stock and add an equal volume of distilled water to make a final 0.1 M Sørensen’s phosphate buffer solution (Sørensen, 1909; Gomori, 1955). Keep in mind that high levels of phosphate may be somewhat toxic to plant cells (Sabatini, et al., 1962) and thus Sørensen’s buffer may not be appropriate for some experiments.Stock solutions: A 0.2 M NaH2PO4 B 0.2 M Na2HPO4A (ml) B (ml) pH 92.0 8.0 5.8 87.7 12.3 6.0 81.5 18.5 6.2 68.5 31.5 6.5 62.5 37.5 6.6 56.5 43.5 6.7 51.0 49.0 6.8 45.0 55.0 6.9 39.0 61.0 7.0 33.0 67.0 7.1 28.0 72.0 7.2 23.0 77.0 7.3 19.0 81.0 7.4 16.0 84.0 7.5 8.5 91.5 7.8 5.3 94.7 8.0
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HPLC 분석법을 논문에서 찾아보고있는데
10mM Potassium phosphate buffer (pH6.9)
pH는 phosphoric acid 로 맞추면 된다지만,
Potassium phosphate 는 종류가 세가지나 되는데
mono, di, Tri중 아무 종류나 사용해도 무방한건가요??
마찬가지로 10mM sodiium phosphate 도 아무 종류나 사용해도 되는건가요??
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답변
조윤환님의 답변
2012-02-09- 0
HPLC 분석시 가장 흔히 사용하는 완충액 중 하나가 인산염 완충액입니다.
님처럼 pH 6.9 완충액을 만들 때는 KH2PO4를 사용하시길 권합니다.
"뭐 아무거나 사용하면 되겠지 " 하고 생각하실 수도 있겠으나 다른 것을 사용하시면 완충액을 제조할 때 불편합니다. 예를 들어 K3PO4를 사용하시면 인산으로 pH를 엄청나게 내려야 합니다.
참고가 되셨길
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HPLC 분석법을 논문에서 찾아보고있는데
10mM Potassium phosphate buffer (pH6.9)
pH는 phosphoric acid 로 맞추면 된다지만,
Potassium phosphate 는 종류가 세가지나 되는데
mono, di, Tri중 아무 종류나 사용해도 무방한건가요??
마찬가지로 10mM sodiium phosphate 도 아무 종류나 사용해도 되는건가요??
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