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미생물이 exopolysaccharides (EPSs)를 생산하는지 알아보는 실험을 하려고 하는데..
그냥 생산 유무만 알수 있으면 됩니다 ㅎ
도통 모르겠네요 ㅠ 논문을 찾아봐도 phenol-sulfuric acid method 이용한다고만
적혀있구요..;; 에공....
액체배양해서... 어떻게 하는거같은데.. 아시는분 있으시면 도움 좀 주세용 ㅠ
- exopolysaccharide
- phenol-sulfuric acid
- EPS
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변
이상후님의 답변
2012-02-28- 0
우선 EPS의 구조적인 측면에서 볼 때, 단당류들이 특정 linking 구조로 연결되어 있으면서, 비탄수화물성 성분들이 치환되어 있는 전형적인 다당류 구조라서 배양액내에서 물분자들과 수소결합을 이루고 있습니다. 미생물이 배양 과정중에 EPS를 생산하게 되면 배양액 자체가 탁도가 증가하게 되며 경우에 따라서는 점도가 증가하기도 합니다. 하지만 실제로 EPS를 생산하는지는 ethanol 침전법을 이용해서 농축한 배양액의 대략 2~5 volumn의 ethanol(경우에 따라서는 acetone을 사용하기도 함)을 가하게 되면 하얗게 침전이 생기는 것을 관찰할 수 있습니다. 이 원리는 물과 EPS사이의 수소결합을 끊어서 EPS와 에탄올과의 수소결합을 형성시켜 침전시키는 원리입니다.
EPS도 물에 잘 녹는 타입과 물에 잘 녹지 않는 타입이 있을 수 있는데, 대부분은 물에 잘 녹는 타입이 많습니다. 물에 잘 녹는 경우는, EtOH ppt를 거친후에 몇차례 물과 에탄올로 washing과정을 거쳐서 TLC로 crude하게 확인할 수 있겠습니다. 보통은 EPS의 구조에 따라서 TLC solvent system이 조금씩 다를 순 있겠으나 butanol: ethanol:water = 5:5:4 / 5:4:4 와 같이 적당한 비율로 혼합된 용매를 사용하여, 완전히 전개한 후에 5% phenol-sulfuric acid로 분무한 후에, 100'C 오븐에서 charring하여 assay 해 볼 수 있습니다. 이러한 기본적인 프로토콜은, 특정 미생물에서 EPS 분리 및 확인이라고 나온 대부분 paper들에서 비슷한 방법들을 사용할 것입니다.
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미생물이 exopolysaccharides (EPSs)를 생산하는지 알아보는 실험을 하려고 하는데..
그냥 생산 유무만 알수 있으면 됩니다 ㅎ
도통 모르겠네요 ㅠ 논문을 찾아봐도 phenol-sulfuric acid method 이용한다고만
적혀있구요..;; 에공....
액체배양해서... 어떻게 하는거같은데.. 아시는분 있으시면 도움 좀 주세용 ㅠ