각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변
김승용님의 답변
2014-02-25- 2
저보다 더 잘하시 분이 답변을 달아주실지도 모르겠지만요.
제가 아는 범위에서 말씀드릴께요.
IS는 일반적으로 분석물질과 유사한 구조를 가지는 것으로 IS를 설정 합니다.
왜냐하면, LC/MS 분석은 분석조건에 분석물질이 영향을 받을 수 있기 때문에 유사한 형태를 가지는 것으로 합니다. 물론 분자량은 달라야 겠지요.
그래서, 분석물질과 IS의 ratio를 가지고 linearity를 구하는 것이 일반적이고 정확합니다. UPLC와 달리 LCMS에서 intensity의 area만 가지고는 정확한 linearity를 구하기 어렵습니다.
잘 이해가 안 되시면 답글 남겨주세요.
김승용(sykim) 2014-03-17intensity？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？ Height？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？ ？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？?？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？ ？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？ ？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？ ？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？, response？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？ ？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？ ？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？??？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？. ？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？ ？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？? ？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？ ？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？...？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？ ？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？ ？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？?？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？ ？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？?？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？ ？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？ ？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？?？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？.
조윤환(brmdolee) 2014-03-18intensity？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？ response？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？ ？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？ ？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？??？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？.
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답변
조윤환님의 답변
2014-02-25- 0
반갑습니다.
내부표준법은 외부표준법으로 신뢰성 있는 정량 결과를 얻기 어려운 경우에 사용하는 방법이 되겠습니다. 일정량의 시료를 취해서 반복 실험을 했을 때 재현성 있는 피크의 면적값이나 높이값을 얻을 수 없는 경우 입니다.
내부표준법에서 내부표준물질의 농도는 항상 일정하게 유지되므로 분석물질의 피크 면적값이나 높이값이 매번 변한다고 해도 내부표준물질과 분석물질의 피크 면적값 또는 높이 값의 비율은 일정하게 유지되는 원리를 이용하는 것 입니다.
내부표준물질을 선정하는 기준은 몇 가지가 있는데......이는 앞서 답변해주신 분이 잘 설명해주신 듯 합니다. 좀더 자세한 내용은 분석과 관련된 교과서를 찾아서 공부를 하시는 것이 좋을 듯 합니다. -
답변
이상후님의 답변
2014-02-26- 0
내부표준물을 사용하는 이유는,
시료의 전처리 과정에서 생길 수 있는 타겟 분석물질의 손실을 보전하는 것이 가장 큰 이유입니다.
왜냐하면 시료를 전처리 하기전에 정해진 양의 내부표준물을 넣게 되면 전처리(분리, 정제)하면서 샘플과 IS도 함께 손실이 되기 때문에 최종적으로 정량할때 정확하게 정량이 되기 때문입니다.
물론 표준곡선 그래프를 만들때도 IS를 넣고 똑같은 전처리 과정을 거쳐서 만들어야 되겠지만요..
내부표준물을 넣지 않고 바로 정량하게 되면 정확성, 정밀성, 회수율 등이 제대로 측정이 안되며, 좋은 결과를 얻을 수 없습니다. 이말은 정량값에 신뢰도가 떨어질수 있다는 의미이기도 합니다.
한편, 국제적으로 통용되는 생체시료분석법에 대한 가이드라인(예, US FDA, CLSI 또는 ICH 등)에도 내부표준물질의 사용을 권장하고 있습니다.
내부표준물질을 선택하는 기준도 있는데,
우선 타겟 분석물질과 구조적, 물리,화학적으로 비슷한 물질을 사용해야 하며, 분석물질과 retention time이 비슷한 시간대에 나와야 하며, 이런 이유에서 보통은 타겟물질에 deutrium이나 13C으로 치환된 IS를 사용하고 있습니다. 하지만 이런 IS도 무작정 선택하면 안되고, LC-MS/MS에서 Q3 ion으로 fragmentation 됐을때, deutrium이나 13C이 있어야만 합니다. 그러기 위해서는 기존 reference를 꼭 참고해야 유사한 IS로 구매해서 사용해야 됩니다.
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답변
서병일님의 답변
2014-09-11- 0
첨부 내부표준물질 첨가분석 참고하세요
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